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克隆的片段连不上T载体怎么回事???
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2011jonathan
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1楼
2014-11-02 09:40:05
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hihe99
银虫
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性别: GG
专业: 生物化学
引用回帖:
16楼
:
Originally posted by
2011jonathan
at 2014-11-03 09:55:23
想问下,连接产物加入感受态后,不吹打只用手指轻弹管壁的话能混匀么,谢谢!...
可以,我都是轻弹的,转化步骤有问题,感受态应该附带了质粒的,用那个做个阳性对照,那个能出来的话说明不是转化的问题
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18楼
2014-11-04 12:35:33
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SundayMilk
银虫
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注册: 2014-09-22
专业: 抗体工程学
问下楼主用Extaq的理由?
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急速潜航~
2楼
2014-11-02 10:13:40
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2011jonathan
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3楼
2014-11-02 11:15:12
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weigh1111
铁杆木虫
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专业: 病原细菌与放线菌生物学
【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+4, 鼓励交流!
2014-11-02 21:59:21
好歹应该有点自连的啊,楼主这个可能原因就很多了~
第一 有可能是你感受态的问题,感受态找个其他质粒验证一下效率,不好用的话就换吧
第二 楼主你好好看看抗生素有没有用错,不管是种类还是用量,PMD19T的话我记得是氨苄青霉素,100纳克/ml的终浓度吧
第三 你PCR扩增完之后做胶回收或者PCR回收没有?没有的话回收DNA之后再来做连接,同时记得片段/载体摩尔数比是3:1-5:1
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4楼
2014-11-02 12:12:58
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