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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 克隆的片段连不上T载体怎么回事？？？
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2011jonathan

禁虫 (小有名气)
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1楼 2014-11-02 09:40:05
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tayifeita

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
2011jonathan(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-05 14:26:32
Extaq，连接酶，t载，还有感受态都换一遍试试，目的片段回收后所融的溶液是否对dna连接酶有干扰？一般试剂盒回收后应该是没问题的。如果实验材料没问题的话那就说转化操作有问题咯，换个人做

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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19楼2014-11-05 08:40:26
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SundayMilk

银虫 (初入文坛)
问下楼主用Extaq的理由？

[ 发自小木虫客户端 ]
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急速潜航~
2楼2014-11-02 10:13:40
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2011jonathan

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2014-11-02 11:15:12
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+4, 鼓励交流！ 2014-11-02 21:59:21
好歹应该有点自连的啊，楼主这个可能原因就很多了~
第一 有可能是你感受态的问题，感受态找个其他质粒验证一下效率，不好用的话就换吧
第二 楼主你好好看看抗生素有没有用错，不管是种类还是用量，PMD19T的话我记得是氨苄青霉素，100纳克/ml的终浓度吧
第三 你PCR扩增完之后做胶回收或者PCR回收没有？没有的话回收DNA之后再来做连接，同时记得片段/载体摩尔数比是3:1-5：1
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4楼2014-11-02 12:12:58
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