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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】克隆连接时间
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xiaoru2010

[交流] 【求助/交流】克隆连接时间 已有11人参与

问一下大家做克隆的时候，一般多少度连接多长时间啊？我用的是PMD19-T载体，上次16度连了23小时，有个1000多的片段还是没连上，菌液PCR出现好多条带……PS：貌似PGEM-T载体25度时间长了什么也连不上
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1楼 2010-06-23 11:16:17
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walker2898

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我做的连接一般是在4度和16度连接12小时，但是不是用你说的这个载体。
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2楼2010-06-23 11:19:57
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wywangying169

银虫 (小有名气)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-06-23 12:35:52

以前做克隆的时候，用的载体是PMD18，一般是4度连接过夜，也就是大概14个小时左右。现在在用一个试剂盒，载体是PEASY-T3，只要连接五分钟就可以了！

[ Last edited by wywangying169 on 2010-6-23 at 14:54 ]
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好好自学，好好工作
3楼2010-06-23 11:29:22
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xiaoru2010

引用回帖:
Originally posted by wywangying169 at 2010-06-23 11:29:22:

以前做克隆的时候，用的载体是PMD18，一般是16度连接过夜，也就是大概14个小时左右。现在在用一个试剂盒，载体是PEAY-T3，只要连接五分钟就可以了！

好强的载体？单卖多少钱a?
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4楼2010-06-23 11:37:36
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xiaoru2010

引用回帖:
Originally posted by walker2898 at 2010-06-23 11:19:57:
我做的连接一般是在4度和16度连接12小时，但是不是用你说的这个载体。

先四后16吗？还是4或16？一共12小时？
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5楼2010-06-23 11:38:25
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段家一凡

木虫 (正式写手)
★
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其实连接一般1-2小时就够了，太长可能还有副作用
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6楼2010-06-23 12:00:00
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-23 16:10:30
16度连接过夜（12-16h）。连接不上还应该考虑载体与目的片段之间的比例（通常是1：3-10）
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梦在路就在！
7楼2010-06-23 13:31:41
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月月大可

木虫 (著名写手)
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-23 16:10:38
TAKARA的pMD18/19载体使用的solution I说明书上写16度30min就可以。不过我一般都是连10h以上。
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8楼2010-06-23 13:38:55
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
过夜一般采取4度连接~~~
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9楼2010-06-23 14:35:46
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wywangying169

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):这个试验方面的可以交流的。 2010-06-23 16:11:39
引用回帖:
Originally posted by xiaoru2010 at 2010-06-23 11:37:36:

好强的载体？单卖多少钱a?

不是载体强，TAKAKA的试剂盒也可以做到这样，TAKARA那个载体是PMD18，也只要连接30分钟。我用的PEASY-T载体的那个用的是全式金生物的产品，60次的价格我们买的是1360元，好像还好用，本来不想说人家公司的名字的，怕楼主以为我是打广告的！呵呵！
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好好自学，好好工作
10楼2010-06-23 15:00:17
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