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xiaoru2010

[交流] 【求助/交流】克隆连接时间 已有11人参与

问一下大家做克隆的时候,一般多少度连接多长时间啊?我用的是PMD19-T载体,上次16度连了23小时,有个1000多的片段还是没连上,菌液PCR出现好多条带……PS:貌似PGEM-T载体25度时间长了什么也连不上
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walker2898

银虫 (小有名气)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我做的连接一般是在4度和16度连接12小时,但是不是用你说的这个载体。
2楼2010-06-23 11:19:57
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wywangying169

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-06-23 12:35:52

以前做克隆的时候,用的载体是PMD18,一般是4度连接过夜,也就是大概14个小时左右。现在在用一个试剂盒,载体是PEASY-T3,只要连接五分钟就可以了!

[ Last edited by wywangying169 on 2010-6-23 at 14:54 ]
好好自学,好好工作
3楼2010-06-23 11:29:22
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xiaoru2010

引用回帖:
Originally posted by wywangying169 at 2010-06-23 11:29:22:

以前做克隆的时候,用的载体是PMD18,一般是16度连接过夜,也就是大概14个小时左右。现在在用一个试剂盒,载体是PEAY-T3,只要连接五分钟就可以了!

好强的载体?单卖多少钱a?
4楼2010-06-23 11:37:36
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xiaoru2010

引用回帖:
Originally posted by walker2898 at 2010-06-23 11:19:57:
我做的连接一般是在4度和16度连接12小时,但是不是用你说的这个载体。

先四后16吗?还是4或16?一共12小时?
5楼2010-06-23 11:38:25
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段家一凡

木虫 (正式写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
其实连接一般1-2小时就够了,太长可能还有副作用
6楼2010-06-23 12:00:00
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫

★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-23 16:10:30
16度连接过夜(12-16h)。连接不上还应该考虑载体与目的片段之间的比例(通常是1:3-10)
梦在路就在!
7楼2010-06-23 13:31:41
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月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-06-23 16:10:38
TAKARA的pMD18/19载体使用的solution I说明书上写16度30min就可以。不过我一般都是连10h以上。
8楼2010-06-23 13:38:55
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

过夜一般采取4度连接~~~
9楼2010-06-23 14:35:46
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wywangying169

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):这个试验方面的可以交流的。 2010-06-23 16:11:39
引用回帖:
Originally posted by xiaoru2010 at 2010-06-23 11:37:36:

好强的载体?单卖多少钱a?

不是载体强,TAKAKA的试剂盒也可以做到这样,TAKARA那个载体是PMD18,也只要连接30分钟。我用的PEASY-T载体的那个用的是全式金生物的产品,60次的价格我们买的是1360元,好像还好用,本来不想说人家公司的名字的,怕楼主以为我是打广告的!呵呵!
好好自学,好好工作
10楼2010-06-23 15:00:17
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