| 查看: 1000 | 回复: 1 | ||
[求助]
新设计的引物扩出来有两条带，是什么原因啊？大哥大姐！
|
|
亲爱的师兄师姐，小妹最近在做一个植物基因的克隆，我是分成两段来扩的。实验已经扩出来前半段序列，后半段序列利用cDNA设计得引物在DNA里面扩增（主要目的是想把外显子和内含子都扩增出来），但是在扩后半段序列跑的时候，电泳成像显示有两条带，一条大约1600bp，一条大约1300bp，而我的目的条带在1600-2000bp之间才对。我用的体系是： DNA 4μL plus Buffer 5μL dNTP 4μL PrF 1μL R 1μL plus TaqE 0.8μL ddH2O 34.2 程序是： 95℃ 5min 95℃ 30sec 退火（48-60℃）1min 72℃ 1min20sec 72℃ 7min 12℃ forever 其中一对引物： Two primers complementarity. Max complementarity in continuous: 3 bp, free energy= 0.30 Kcal/mol 5'-TGAAGAAGATGCTGGGGAAGAAGA-3' ||| 3'-GTTATTTGGGAGGCGAAATAGG-5' 请师兄师姐帮忙指点一下，感激不尽啊！！祝师兄师姐实验顺利，生活愉快！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有217人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助引物设计和载体构建问题
已经有6人回复
- PCR产物，只有引物二聚体，，怎么办
已经有21人回复
- 请问一下要是一对引物做普通PCR的目的条带都很淡
已经有18人回复
- Marker条带问题及引物二聚体
已经有13人回复
- 找到一对细菌的通用引物，大家看下为什么会有简并碱基
已经有9人回复
- PCR引物设计问题，求教大神~
已经有11人回复
- 设计了简并引物，PCR扩不出条带
已经有9人回复
- 引物设计时酶切位点的添加。
已经有4人回复
- 引物设计 基因全长的获得
已经有13人回复
- 急！各位帮忙看看，PCR后跑的琼脂糖凝胶电泳图，条带不清晰原因是什么？
已经有16人回复
- PCR扩增DNA序列无条带
已经有46人回复
- 反转录后扩增有好几条带
已经有8人回复
- 请教不知道质粒信息的情况下，怎样设计引物来进行测序
已经有7人回复
- 关于基因测序引物的设计
已经有7人回复
- 请大家帮忙看看引物二聚体的问题
已经有5人回复
- PCR不出目的条带的原因
已经有12人回复
- 设计了3条引物，请大家帮我看看是否可用，两个哪个好一些呢？谢谢了！
已经有12人回复
- ISSR-PCR的引物问题是只用1条？
已经有9人回复
- 测序结果发现，在引物位置多了一位碱基，是什么原因引起的？
已经有16人回复
- PCR一直扩不出目的条带
已经有10人回复
- 【求助/交流】pcr反应目的条带很浅，引物二聚体很亮
已经有33人回复
- 【求助/交流】PCR只有引物二聚体，有图
已经有20人回复
2楼2014-09-19 14:52:22
100