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新设计的引物扩出来有两条带，是什么原因啊？大哥大姐！
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亲爱的师兄师姐，小妹最近在做一个植物基因的克隆，我是分成两段来扩的。实验已经扩出来前半段序列，后半段序列利用cDNA设计得引物在DNA里面扩增（主要目的是想把外显子和内含子都扩增出来），但是在扩后半段序列跑的时候，电泳成像显示有两条带，一条大约1600bp，一条大约1300bp，而我的目的条带在1600-2000bp之间才对。我用的体系是： DNA 4μL plus Buffer 5μL dNTP 4μL PrF 1μL R 1μL plus TaqE 0.8μL ddH2O 34.2 程序是： 95℃ 5min 95℃ 30sec 退火（48-60℃）1min 72℃ 1min20sec 72℃ 7min 12℃ forever 其中一对引物： Two primers complementarity. Max complementarity in continuous: 3 bp, free energy= 0.30 Kcal/mol 5'-TGAAGAAGATGCTGGGGAAGAAGA-3' ||| 3'-GTTATTTGGGAGGCGAAATAGG-5' 请师兄师姐帮忙指点一下，感激不尽啊！！祝师兄师姐实验顺利，生活愉快！ |
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2楼2014-09-19 14:52:22