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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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永远一片天

新虫 (正式写手)

[求助] 找到一对细菌的通用引物,大家看下为什么会有简并碱基

引物里面有简并碱基到底是好呢,还是不好,求解答GAGAGTTTGATCCTGGCTCAG 和GWATTACCGCGGCKGCTG位置是27到561左右,这样的引物据说是灵敏性高,可以检测出细菌,我做的实验目的不是测序,只要证明样本里面有细菌就行了,求高手解答,这样的引物可以吗?
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lm2570

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
永远一片天: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-12-03 19:00:36
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-03 20:22:33
7F:5’-AGAGTTTGATCCATGGCTCAG-3’;1541R:5’-AAGGAGGTGATCCAGCC-3’
2楼2013-12-03 18:13:19
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永远一片天

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lm2570 at 2013-12-03 18:13:19
7F:5’-AGAGTTTGATCCATGGCTCAG-3’;1541R:5’-AAGGAGGTGATCCAGCC-3’

这样产物长度会不会太长,1500bp左右,一般的酶好像活性都不够的,我怕扩不出来。
3楼2013-12-03 19:00:18
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lm2570

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 永远一片天 at 2013-12-03 19:00:18
这样产物长度会不会太长,1500bp左右,一般的酶好像活性都不够的,我怕扩不出来。...

没问题的,我做过很多次,前一个是27F ,刚才打掉了一个字

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2013-12-03 19:20:38
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永远一片天

新虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by lm2570 at 2013-12-03 19:20:38
没问题的,我做过很多次,前一个是27F ,刚才打掉了一个字...

啊,师姐好!那退火温度大概设置多少?这对引物可以扩增出大多数的细菌16SrRNA的吗
5楼2013-12-03 19:33:25
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永远一片天

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lm2570 at 2013-12-03 19:20:38
没问题的,我做过很多次,前一个是27F ,刚才打掉了一个字...

还有,师姐做实验的目的也是为了扩增出细菌的16SrRNA吗?我仅仅为了证实有细菌的存在,这样这对引物也可以吧?
6楼2013-12-03 19:42:16
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lm2570

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 永远一片天 at 2013-12-03 19:33:25
啊,师姐好!那退火温度大概设置多少?这对引物可以扩增出大多数的细菌16SrRNA的吗...

我是做细菌的鉴定,退火温度需要摸索,不同的细菌不一样的
7楼2013-12-03 19:44:50
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永远一片天

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lm2570 at 2013-12-03 19:44:50
我是做细菌的鉴定,退火温度需要摸索,不同的细菌不一样的...

那7F:5’-AGAGTTTGATCCATGGCTCAG-3’;1541R:5’-AAGGAGGTGATCCAGCC-3’这对引物,在一般条件下是不是不一定能扩增出细菌的16SrRNA?那也就不一定证明样本中有细菌了,是这样的吗?一定要回一下哦~谢谢啦
8楼2013-12-03 20:06:41
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lm2570

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 永远一片天 at 2013-12-03 20:06:41
那7F:5’-AGAGTTTGATCCATGGCTCAG-3’;1541R:5’-AAGGAGGTGATCCAGCC-3’这对引物,在一般条件下是不是不一定能扩增出细菌的16SrRNA?那也就不一定证明样本中有细菌了,是这样的吗?一定要回一下哦~谢谢啦...

一般有细菌DNA模板,多数是可以扩增到,扩增到说明有细菌,没有扩增到,则有多种可能

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9楼2013-12-03 20:24:14
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lm2570

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 永远一片天 at 2013-12-03 20:06:41
那7F:5’-AGAGTTTGATCCATGGCTCAG-3’;1541R:5’-AAGGAGGTGATCCAGCC-3’这对引物,在一般条件下是不是不一定能扩增出细菌的16SrRNA?那也就不一定证明样本中有细菌了,是这样的吗?一定要回一下哦~谢谢啦...

如果只为了说明有菌,可做无菌检验

[ 发自小木虫客户端 ]
10楼2013-12-03 20:27:26
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