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廿四

铁虫 (小有名气)

[求助] 如何通过设计引物,插入三个新的DNA碱基

各位虫友好,现有一实验技术上的问题,欢迎大家多多解惑:

在下的序列如下,

T ATG GGC GCG GGG CCG GGC......
(前四个碱基为NdeI 酶切位点,同时atg为翻译起始位点,对应氨基酸序列为M G A G P G......)

现希望在M 和 G 之间插入一个C,即半胱氨酸(DNA序列为 TGT)。

请问我的正向引物这样设计可行么:

CATATGTGTGGCGCGGGGCCGGG

注:以上碱基序列均为5’到3’。
谢谢大家!
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-09 02:15:35
我觉得可以啊  在看看退火温度吧 好像GC含量比较高啊
2楼2013-11-08 21:48:43
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廿四

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-11-08 21:48:43
我觉得可以啊  在看看退火温度吧 好像GC含量比较高啊

是啊 退火温度78.9, premier预测的,实际可能略低。。。GC含量实在没办法,本身序列在那里放着,只能加DMSO试试了。。。谢谢你!
3楼2013-11-08 21:59:16
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bolysu

禁虫 (著名写手)


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gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-11-09 14:03:17
本帖内容被屏蔽

4楼2013-11-09 10:34:46
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bingdong05

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以的,引物设计稍长点,即插入点后面的序列设计20-30个碱基,应该可以,楼主注意的是退火温度以及GC含量,这个影响还是蛮大的
5楼2013-11-09 16:10:41
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