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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何通过设计引物，插入三个新的DNA碱基
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廿四

铁虫 (小有名气)

[求助] 如何通过设计引物，插入三个新的DNA碱基

各位虫友好，现有一实验技术上的问题，欢迎大家多多解惑：

在下的序列如下，

T ATG GGC GCG GGG CCG GGC......
（前四个碱基为NdeI 酶切位点，同时atg为翻译起始位点，对应氨基酸序列为M G A G P G......）

现希望在M 和 G 之间插入一个C，即半胱氨酸（DNA序列为 TGT）。

请问我的正向引物这样设计可行么：

CATATGTGTGGCGCGGGGCCGGG

注：以上碱基序列均为5’到3’。
谢谢大家！
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1楼 2013-11-08 20:45:14
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bingdong05

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以的，引物设计稍长点，即插入点后面的序列设计20-30个碱基，应该可以，楼主注意的是退火温度以及GC含量，这个影响还是蛮大的
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5楼2013-11-09 16:10:41
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-09 02:15:35
我觉得可以啊  在看看退火温度吧 好像GC含量比较高啊
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2楼2013-11-08 21:48:43
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廿四

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-11-08 21:48:43
我觉得可以啊  在看看退火温度吧 好像GC含量比较高啊

是啊 退火温度78.9， premier预测的，实际可能略低。。。GC含量实在没办法，本身序列在那里放着，只能加DMSO试试了。。。谢谢你！
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3楼2013-11-08 21:59:16
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bolysu

禁虫 (著名写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-11-09 14:03:17
本帖内容被屏蔽
4楼2013-11-09 10:34:46
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