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[交流]
引物设计时总是发生严重错配怎么办？敬请大家指点！ 已有2人参与
我要设计一对Real-Time PCR（染料法）的引物，但是由于目的序列自身碱基重复较多，设计引物时经常发生错配，软件（PrimerPremier5）给出的100对引物都有错配，最好的情况也是其中一条正向引物或反向引物有错配。
请教一下这种情况下应该怎么设计引物？
另外，设计出的引物在NCBI上BLAST，应该以哪一项评分为选择依据，是主要看Query coverage吗？可是有时Query coverage100%不一定排在前面。
第一次设计引物，请大家多多指教！
谢谢！
[ Last edited by 小虫之老虫 on 2009-10-24 at 15:46 ] |
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