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snowice

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】问大家一个设计引物对阅读框的问题 已有3人参与

我现在要把一段基因(带ATG和终止密码子)连在pRSET-C表达载体MCS里面,想获得带6xHis的融合蛋白,6xHis在MCS上游,设计引物时对了正向引物的阅读框,加了两个碱基让基因正确从ATG开始读,但反向引物设计时没对阅读框,1.这样是否对融合表达有影响;2.对下游的氨苄抗性表达是否有影响呢?该载体自带T7启动子和T7 transcription terminator。
http://www.pharmon.com.cn/product/show.asp?id=352918  上面有pRSET-C的简略图谱,谢谢各位啦
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爱吃爱睡懒得要死的猪头
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没有影响,检定完毕
2楼2010-05-12 03:54:24
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gastrodia

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
检查正向的阅读框即可,,要求能够从HIS6一直读到你 基因的结束

[ Last edited by gastrodia on 2010-5-12 at 08:14 ]
3楼2010-05-12 08:13:19
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snowice

银虫 (小有名气)

谢谢各位,只是转了好几次板上什么都没有,害怕是没对下游阅读框影响ap的抗性了
爱吃爱睡懒得要死的猪头
4楼2010-05-12 11:43:45
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