| 查看: 1294 | 回复: 2 | |||
clark2010金虫 (小有名气)
|
[交流]
双酶切经验分享 已有1人参与
|
|
前段时间做了双酶切后连接，载体7.5 Kb （小片段只有300 bp）， 连接用片段是从T载体上切下来的，分别是1 Kb，1.5 Kb，和2 Kb，fermentas的fast酶，切了15min后胶回收，连接转化之后挑单菌验证，各挑两个转化子，结果发现只有1 Kb的片段连上了，其余4个都是载体自连。 第二次做的时候两个酶的用量都减半，然后将反应时间延长到1 h，最后挑了6个转化子，验证全部正确。 个人认为可能的原因： 在说明书上写了酶的用量加起来不能超过总体积的1/10，而两个都按20 uL体系加1 uL酶的话，如果枪尖沾点甘油，打进去就超过1/10了，可能会影响某些酶的效率，酶的用量减半可以解决这个问题。而延长反应时间可以弥补酶量不足的问题，所以可以得到比较好的结果。 个人意见，请大家讨论。 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有134人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请问有人用双酶切过petduet-1载体吗？用bamHI和Hind3 双酶切
已经有5人回复
- 纠结的分子实验，双酶切连不上，求助
已经有14人回复
- 双酶切后目的条带很淡，回收不到
已经有15人回复
- 关于分步双酶切
已经有7人回复
- 双酶切后载体片段变小
已经有8人回复
- 感受态细胞提取的质粒酶解后为什么带型不一样？
已经有12人回复
- 双酶切温度控制
已经有7人回复
- （侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略
已经有89人回复
- 载体单酶切后去磷酸化还会自连吗？
已经有5人回复
- southern blot 的酶切问题
已经有9人回复
- 单酶切，酶连之后验证问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于双酶切
已经有6人回复
- 【求助/交流】双酶切PCR产物的时间
已经有7人回复
- 【分享】分子克隆实验专题-（二）酶切连接要点探讨
已经有15人回复
- 【交流】生物实验小技巧－抛玉引玉(欢迎大家分享自己的经验与技巧~~)
已经有48人回复
- 【求助/交流】不完全酶切
已经有8人回复
- 【求助/交流】相邻酶切位点的双酶切
已经有7人回复
- 【求助/交流】双酶切载体总是切不完全
已经有11人回复
- 【求助/交流】大家酶切载体怎么切？一般切多久？
已经有6人回复
- 【求助/交流】DNase I酶切实验
已经有8人回复
- 【求助】关于出生双认证的问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】单酶切载体竟然没切开，寻求原因？？
已经有15人回复
潘潘0227
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 214.3
- 帖子: 151
- 在线: 45.6小时
- 虫号: 1421484
- 注册: 2011-09-28
- 性别: MM
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2015-10-31 20:20:05
clark2010
金虫 (小有名气)
- 应助: 30 (小学生)
- 金币: 2714.8
- 红花: 4
- 帖子: 80
- 在线: 80.2小时
- 虫号: 1115552
- 注册: 2010-10-07
- 专业: 环境微生物学
3楼2015-11-01 04:51:36