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hajierlove

铜虫 (正式写手)

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[求助] 菌液pcr,坐等求助已有7人参与

今天做的菌液pcr，三个基因挑了48个单克隆，做菌液pcr，引物是M13通用引物，出来的目的条带都是250bp。750bp。目的片段是500bp。怎么回事？只能证明没有连接上吗？

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踏实

1楼 2014-07-23 20:33:08

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luwei13566

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:31:49

你的载体是哪个牌子的？如果是pMD19-T的话一般用M13通用引物的话除了你的目的基因在基因两端会多扩出150bp以上的一段载体片段，所以你的那个750bp的片段可能是对的，而你的那个250bp的片段可能扩的是空载体。
拿你扩增出750bp片段的菌再用你扩基因的引物做个菌落PCR，或者直接提取质粒双酶切验证都可以，只要大小正确就可以去测序了。