24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1837  |  回复: 7

hhxittxs

新虫 (初入文坛)

[求助] PBⅠ121质粒双酶切问题 已有4人参与

本人做PBⅠ121质粒双酶切,内切酶为BamHⅠ和HindⅢ,切了24h,这是PBⅠ121双酶切凝胶电泳图,做了个重复,1,3是酶切前的   2,4分别是对应酶切后的。2,4下是有两条带的(红色圈圈里面),不仔细看看不出来。marker为2000,这能表示切开了吗?
本人新手,金币不多,各位大神乐善好施帮个忙嘞!

PBⅠ121质粒双酶切问题
1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzj926521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
hhxittxs(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-07-05 18:16:06
为什么不用5000marker做标记呢?如果电泳图上显示的酶切后的两个片段之和大小与酶切之前的大小差不多一致,并且切下的短条带大小是目的带大小,差不多可以确定是正确的,进一步验证的话就送去测序吧。另外看你的电泳图中条带很清晰但是亮度不太大,如果质粒浓度可以的话就是电泳液需要换一下了,这样切下的条带可能会明显些
2楼2014-07-05 08:02:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hhxittxs

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yzj926521 at 2014-07-05 08:02:04
为什么不用5000marker做标记呢?如果电泳图上显示的酶切后的两个片段之和大小与酶切之前的大小差不多一致,并且切下的短条带大小是目的带大小,差不多可以确定是正确的,进一步验证的话就送去测序吧。另外看你的电泳 ...

啊,大概能判断出,切下的短条带大小是目的带大小,但是为什么它浓度这么低呢?还有就是我把上面的大条带切胶回收了之后,发现浓度降低好多,怎么回事呢
3楼2014-07-05 16:00:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzj926521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by hhxittxs at 2014-07-05 16:00:18
啊,大概能判断出,切下的短条带大小是目的带大小,但是为什么它浓度这么低呢?还有就是我把上面的大条带切胶回收了之后,发现浓度降低好多,怎么回事呢...

内切酶的能力有限啦,酶切体系中加的内切酶量少,切下来的条带就相对少吧,如果只是验证目的带是否连进载体中的话,那你这样不是成功了吗
4楼2014-07-06 07:38:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzj926521

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by hhxittxs at 2014-07-05 16:00:18
啊,大概能判断出,切下的短条带大小是目的带大小,但是为什么它浓度这么低呢?还有就是我把上面的大条带切胶回收了之后,发现浓度降低好多,怎么回事呢...

胶回收中最后洗脱DNA的过程中会有损失的,浓度本来就不高的回收后检查有的都不一定能在电泳图上看到条带。可以用紫外分光光度计测一下浓度定量一下
5楼2014-07-06 07:41:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

可帅儿

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-07 16:24:22
用一个大的MARKER不是看得更清楚点吗?比如用10k的。PBI121这个载体我们以前常用的,拷贝数很低,所以切的时候尽量要多切,最好不要用水补足了。PBI121有8k多,用BamHI/HindIII切下来大约600bp片段。看你电泳图掉的片段不明显,只能说是没切完全。酶切时间可以缩短,但要保证限制酶的量足够。这个载体本来就不太好切,只能说有些细节注意一下。
追随自己的心!不要做让自己后悔的事!
6楼2014-07-07 15:08:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-07-16 12:54:06
你那个不亮的片段之所以不亮,原因在于它占质粒的比例太小了。
如果你切1ug,质粒1Wbp,片段2Kbp,那么你的片段就有0.2ug。同理,你对比一下你的就可以了。
7楼2014-07-07 15:35:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

j6918936

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验! 2014-07-16 12:54:25
切开了,因为121内切酶的切割效率不高,就会是这样的,我的双酶切结果也是如此,请教砖家得出让我放心的结果。
8楼2014-07-07 16:51:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hhxittxs 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工调剂 10+9 下一站上岸@ 2026-04-10 26/1300 2026-04-10 15:50 by 柴小白
[考研] 一志愿华东师范生物学326分,求调剂 +8 刘墨墨 2026-04-09 8/400 2026-04-10 12:00 by pengliang8036
[考研] +6 化工专硕323分 2026-04-04 6/300 2026-04-10 10:04 by may_新宇
[考研] 22408 366分,本科211,一志愿西工大 +3 Rubt 2026-04-09 3/150 2026-04-10 09:38 by liuhuiying09
[考研] 308求调剂 +21 倘若起风了呢 2026-04-05 21/1050 2026-04-10 08:13 by Sammy2
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +16 ioodiiij 2026-04-08 16/800 2026-04-09 23:08 by wolf97
[考研] 计算机11408,286分求调剂 +9 木子念晞 2026-04-05 9/450 2026-04-09 20:04 by vgtyfty
[考研] 材料299专硕求调剂 +10 +21 2026-04-09 10/500 2026-04-09 17:34 by 1753564080
[考研] 调剂 +12 月@163.com 2026-04-08 12/600 2026-04-09 14:27 by rl1980
[考研] 265求调剂 +4 风说她早忘了 2026-04-07 4/200 2026-04-09 13:59 by only周
[考研] 材料307分求大佬组收留 +17 Hll胡 2026-04-07 17/850 2026-04-09 10:53 by liuhuiying09
[考研] 材料科学与工程320求调剂,080500 +12 黄瓜味薯片 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:26 by luoyongfeng
[考研] 263分B区求调剂 +6 李nihao 2026-04-08 6/300 2026-04-08 09:38 by 南开小綦
[考研] 一志愿西南090202求调剂 +4 在线求有学上 2026-04-07 4/200 2026-04-07 19:47 by biomichael
[考研] 338求调剂 +4 我想上岸ii 2026-04-05 4/200 2026-04-06 21:04 by 木子君1218
[考研] 346分的生物与医药08600求调剂 +6 常雨阳上岸 2026-04-05 7/350 2026-04-06 12:36 by lys0704
[考研] 求调剂到0856材料工程 +3 程9915 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:15 by 蓝云思雨
[考研] 313求调剂 +5 海日海日 2026-04-04 5/250 2026-04-05 15:52 by jndximd
[考研] 309求调剂 +4 快乐的小白鸽 2026-04-04 5/250 2026-04-04 15:55 by cql1109
[考研] 求生物学专业调剂-332分 +5 云朵遛弯指南 2026-04-04 5/250 2026-04-04 10:05 by rzh123456
信息提示
请填处理意见