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1楼2014-07-04 21:38:41

yzj926521

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hhxittxs(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-05 18:16:06

为什么不用5000marker做标记呢？如果电泳图上显示的酶切后的两个片段之和大小与酶切之前的大小差不多一致，并且切下的短条带大小是目的带大小，差不多可以确定是正确的，进一步验证的话就送去测序吧。另外看你的电泳图中条带很清晰但是亮度不太大，如果质粒浓度可以的话就是电泳液需要换一下了，这样切下的条带可能会明显些

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2楼2014-07-05 08:02:04

hhxittxs

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2楼: Originally posted by yzj926521 at 2014-07-05 08:02:04
为什么不用5000marker做标记呢？如果电泳图上显示的酶切后的两个片段之和大小与酶切之前的大小差不多一致，并且切下的短条带大小是目的带大小，差不多可以确定是正确的，进一步验证的话就送去测序吧。另外看你的电泳 ...

啊，大概能判断出，切下的短条带大小是目的带大小，但是为什么它浓度这么低呢？还有就是我把上面的大条带切胶回收了之后，发现浓度降低好多，怎么回事呢

3楼2014-07-05 16:00:18

yzj926521

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3楼: Originally posted by hhxittxs at 2014-07-05 16:00:18
啊，大概能判断出，切下的短条带大小是目的带大小，但是为什么它浓度这么低呢？还有就是我把上面的大条带切胶回收了之后，发现浓度降低好多，怎么回事呢...

内切酶的能力有限啦，酶切体系中加的内切酶量少，切下来的条带就相对少吧，如果只是验证目的带是否连进载体中的话，那你这样不是成功了吗

4楼2014-07-06 07:38:35

yzj926521

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胶回收中最后洗脱DNA的过程中会有损失的，浓度本来就不高的回收后检查有的都不一定能在电泳图上看到条带。可以用紫外分光光度计测一下浓度定量一下

5楼2014-07-06 07:41:32

可帅儿

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-07 16:24:22

用一个大的MARKER不是看得更清楚点吗？比如用10k的。PBI121这个载体我们以前常用的，拷贝数很低，所以切的时候尽量要多切，最好不要用水补足了。PBI121有8k多，用BamHI/HindIII切下来大约600bp片段。看你电泳图掉的片段不明显，只能说是没切完全。酶切时间可以缩短，但要保证限制酶的量足够。这个载体本来就不太好切，只能说有些细节注意一下。