应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切之后怎么知道切开了呢？
51/1返回列表
查看: 3717  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lialee22

木虫 (著名写手)

黑钻会员

[求助] 双酶切之后怎么知道切开了呢？ 已有4人参与

pET-28a(+)，酶切位点为 Nde I 和 Not I 。两个位点之间只有70bp。

双酶切之后我怎么知道切开了呢？

跑电泳的时候70bp早就跑出去了。

用单酶切做对照，也不行。

有什么办法吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
诸事顺遂
1楼 2014-05-22 18:06:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

穆忆枫

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lialee22(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-05-27 21:10:31
告诉你，双酶切如果中间只有70bp那你就别想看到两条带，你双酶切时间久点，跟原质粒对照，只要两个酶在通用buffer中活性很高的话，会切开，你在连接片段，应该会成功，如果切太大量的话，一是浪费，二是也不一定可以看到小条带。建议，双酶切时间久点，在后面你构建质粒后还有测序保证呢。
赞一下 回复此楼
5楼2014-05-23 13:08:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)
测序！

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
2楼2014-05-22 18:10:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HYZ221314

至尊木虫 (职业作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lialee22(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-05-27 21:10:19
有两个酶切位点，如果都切成功，正常应该是两天带，因为质粒是环状的；如果单酶切，那就得看你质粒的长度和酶切位点咯，但是只是一条带

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
青山不断，绿水长流
3楼2014-05-22 18:13:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jonew

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你电泳的时候干嘛非得跑完呢？ 2000MARKER 点一点  然后跑上五六分钟 看看有没有没有 不就行了？ 然后接着跑  看看剩下的啊
赞一下 回复此楼
借口很贱，，，
4楼2014-05-22 21:27:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-15 06:38 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:01 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-15 05:49 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-15 05:26 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:13 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 01:21 by mibUvS8DDCwf
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:57 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 23:45 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:33 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:21 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭