24小时热门版块排行榜    

查看: 3538  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

gu666hong

银虫 (小有名气)

[求助] Ecor Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切结果,目的条带有,可是另一条带比原来质粒还要大,怎么解释呢 已有1人参与

双酶切结果,切出来比原质粒还要大的条带,不明白,求解释

我的加样顺序依次1-8是Marker 5000,TE原质粒,TE酶切结果,TF原质粒,TF酶切结果,ED3质粒,ED3酶切结果,ED3酶切结果

Ecor Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切结果,目的条带有,可是另一条带比原来质粒还要大,怎么解释呢
Administrator 2014-05-16 15hr 52min.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
gu666hong: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-05-17 09:22:43
引用回帖:
3楼: Originally posted by gu666hong at 2014-05-16 21:11:14
那我这酶切算成功的么,
我原质粒单酶切以后和这个比较可以看出来。
我的问题为什么我的目的条带这么微弱呢,想回收目的片段的话 怎么办呢,我想的是加长酶切时间,之前我是酶切了2个小时。不知道对不对呢?...

你这个切的没有问题,目的片段比较微弱是因为片段比较小,所以总的DNA质量比较小,结合EB燃料少,所以染不亮,要获得更多的目的片段,需要加大酶切载体的量而不是酶切时间
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-05-16 21:18:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-05-16 20:47:33
这种情况是因为,一般抽提的质粒有三种构象,线性,开环,超螺旋(超螺旋的越多,质粒质量越好),虽然他们的分子量一样,但是在琼脂糖胶的泳动速度不同,由快到慢分别为:超螺旋>线性>开环

你的质粒用EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切,虽然有目的条带,但是很小,大条带被线性化后即使减去这一小段序列,电泳泳动速度还是比超螺旋的慢,所以得到,另一条带比原来质粒还要大

看质粒大小时,将质粒单酶切线性化后电泳然后和marker进行比较才有意义
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-05-16 18:08:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gu666hong

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-16 18:08:45
这种情况是因为,一般抽提的质粒有三种构象,线性,开环,超螺旋(超螺旋的越多,质粒质量越好),虽然他们的分子量一样,但是在琼脂糖胶的泳动速度不同,由快到慢分别为:超螺旋>线性>开环

你的质粒用EcoRⅠ ...

那我这酶切算成功的么,
我原质粒单酶切以后和这个比较可以看出来。
我的问题为什么我的目的条带这么微弱呢,想回收目的片段的话 怎么办呢,我想的是加长酶切时间,之前我是酶切了2个小时。不知道对不对呢?
3楼2014-05-16 21:11:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gu666hong

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2014-05-16 21:18:13
你这个切的没有问题,目的片段比较微弱是因为片段比较小,所以总的DNA质量比较小,结合EB燃料少,所以染不亮,要获得更多的目的片段,需要加大酶切载体的量而不是酶切时间...

好的,谢谢啦
5楼2014-05-17 09:23:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 不应该看fileCode +5 且听虎啸 2026-08-12 5/250 2026-08-12 16:19 by 云上清扬
[基金申请] FileCode能看出啥? +8 要乐观耀哥 2026-08-10 21/1050 2026-08-12 16:08 by 云上清扬
[基金申请] 长年满屏的广告,版主太不责任了。基金也等的急 +4 gltch 2026-08-12 4/200 2026-08-12 16:08 by eulota
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 35/1750 2026-08-12 14:38 by sdfapple719
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
信息提示
请填处理意见