应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切总是切不开。。。
61/1返回列表
查看: 1390  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

带走云彩

银虫 (小有名气)

[求助] 双酶切总是切不开。。。 已有2人参与

不知道是模板的酶切位点出问题了，还是酶有问题，总之很少能成功切开的，这次又这样，。。。如图，2为质粒，1为hindIII和Ecor V双酶切，可是，根本没有两条带，切开的话，一条1500，一条3500，质粒约5000，求解惑！！

双酶切总是切不开。。。
20140506 Ptrc+双酶切验证模板2.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
怎知一死生为虚诞？
1楼 2014-05-06 19:48:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
带走云彩(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-06 22:14:47
有时候质粒量太大也会导致酶切困难。从条带亮度看，楼主质粒的上样量都有几百ng了吧，可以把用量减少到1/10试试。
酶切时DNA不是越多越好，酶的说明书对用量都会有说明的，可以去对照说明书看看是不是真的过量了。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-05-06 21:00:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
带走云彩(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-06 22:14:57
带走云彩: 金币+1, ★有帮助 2014-05-07 09:25:09
1. 双酶切buffer是否合适？
2. 适当加大酶用量，延长酶切时间；
3. 还不行就分步酶切。。。
赞一下 回复此楼
做一个阳光、开朗的小和尚
3楼2014-05-06 21:27:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
带走云彩: 金币+1 2014-05-07 09:27:34
HindIII和EcoRV酶切的buffer基本不通用，要么加酶量，要么延长时间，这个是必须的。
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-07 03:41:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

带走云彩

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2014-05-06 21:00:03
有时候质粒量太大也会导致酶切困难。从条带亮度看，楼主质粒的上样量都有几百ng了吧，可以把用量减少到1/10试试。
酶切时DNA不是越多越好，酶的说明书对用量都会有说明的，可以去对照说明书看看是不是真的过量了。

但是一单位的酶不都能切1ug的DNA么？而且量少的话总是怕条带不显啊。。。
赞一下 回复此楼
怎知一死生为虚诞？
5楼2014-05-07 09:24:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

带走云彩

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by meng_xu at 2014-05-07 03:41:18
HindIII和EcoRV酶切的buffer基本不通用，要么加酶量，要么延长时间，这个是必须的。

都是promega的，选了相对活性都可以的muticore buffer
赞一下 回复此楼
怎知一死生为虚诞？
6楼2014-05-07 09:27:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 带走云彩 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 暗涌afhb 2026-03-16 3/150 2026-03-20 00:28 by 河南大学校友
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +8 zlingli 2026-03-13 8/400 2026-03-19 16:32 by 轻松不少随
[考研] 一志愿北京化工大学0703化学318分，有科研经历，求调剂 +3 一瓶苯甲酸 2026-03-14 3/150 2026-03-19 15:17 by 尽舜尧1
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +5 枫桥ZL 2026-03-18 7/350 2026-03-19 14:52 by 功夫疯狂
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 317求调剂 +3 申子申申 2026-03-19 6/300 2026-03-19 14:16 by 申子申申
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-16 12/600 2026-03-19 11:10 by 生物工程调剂
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 299求调剂 +5 △小透明* 2026-03-17 5/250 2026-03-18 11:49 by 尽舜尧1
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭