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芥末猫

银虫 (小有名气)

[交流] fermentas 酶 双酶切体系 已有5人参与

第一次做双酶切，请教前辈，这双酶切体系该怎么设计呢？
DoubleDigest™  - 打印
Double Digestion with BamHI, EcoRI
We recommend:
Buffer 2X Tango™
2-fold excess of BamHI
EcoRI
Incubate at 37°C
Other options (presented in the order of decreasing restriction enzyme activity):
1.Buffer EcoRI
2-fold excess of BamHI
EcoRI
Incubate at 37°C
2.Buffer BamHI
BamHI
2-fold excess of EcoRI
Incubate at 37°C
3.Buffer R
BamHI
EcoRI
Incubate at 37°C


这是他们公司网站上的说明，体系该怎么设计啊，尤其这句“2-fold excess of BamHI ”，怎么理解呢？！！多谢指教
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1楼 2012-04-17 22:03:18
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doublehelix

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
体系按照标准来就可以了，2-fold excess of BamHI ,常规2倍多量的BamHI
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2楼2012-04-17 23:20:45
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anzaigtt

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用推荐的体系做。
其实，都没有太大的影响。这两个酶，很好切。 鉴定的话，15分钟可能就够了。如果是连接，可以考虑2小时以上。
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3楼2012-04-18 07:53:53
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用他推荐的buffer吧，Buffer 2X Tango™
fermentas的快酶已经做的很不错了，buffer都是通用的，就不存在这种情况了。
我们现在都是用他们公司的快酶。
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Thank-you，so-blue.
4楼2012-04-18 09:45:34
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hc1027

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by susizheng at 2012-04-18 09:45:34:
用他推荐的buffer吧，Buffer 2X Tango™
fermentas的快酶已经做的很不错了，buffer都是通用的，就不存在这种情况了。
我们现在都是用他们公司的快酶。

请问 fermentas的 连接要多长时间呀？

我看别人论文上都是16℃连接过夜。而fermentas的T4 DNA lignase 说的是22℃只要1h。 是这样吗？谢谢
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5楼2012-04-26 22:26:02
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amilie030312

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hc1027 at 2012-04-26 22:26:02:
请问 fermentas的 连接要多长时间呀？

我看别人论文上都是16℃连接过夜。而fermentas的T4 DNA lignase 说的是22℃只要1h。 是这样吗？谢谢

NEB的T4室温15分钟就可以了
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6楼2012-05-02 15:59:02
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