| 查看: 3343 | 回复: 18 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
关于PCR连接后菌液鉴定的问题 已有10人参与
|
||
| PCR连接完成后，质粒转化入感受态细胞培养出单菌落后，进行菌液鉴定并跑胶，出现的条带大小是不是应该是目的片段加两引物大小？ |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有132人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR产物做克隆，菌液涂平板后长得很慢是什么原因？
已经有17人回复
- 菌液PCR出现问题了
已经有23人回复
- 菌液PCR为什么有杂带而且挺亮的
已经有5人回复
- 菌液PCR的假阳性是什么原因造成的？
已经有7人回复
- 大神救命！！！菌液PCR 出来酶切质粒没有目的条带
已经有5人回复
- 转化后细菌提质粒，PCR条带很诡异
已经有14人回复
- 构建载体后，菌液PCR，没有目的条带！！！
已经有10人回复
- 挑单克隆后，菌液PCR检测所有条带都偏小，目的条带没有出现
已经有9人回复
- 转化后菌液PCR鉴定，没有目的条带
已经有15人回复
- 菌液PCR出现杂带是什么原因？
已经有17人回复
- 菌液PCR没东西，但是提完质粒能跑出来条带，为什么啊？
已经有16人回复
- 原核表达pGEX-4T-1载体构建后，菌液pcr用什么引物
已经有12人回复
- pfu扩增，菌液PCR问题
已经有4人回复
- 菌液PCR是阳性，却提不出来阳性质粒！求助
已经有31人回复
- 求帮忙分析下菌液PCR检测结果
已经有19人回复
- 菌液PCR验证又失败了
已经有15人回复
- 连接转化后鉴定大小不对，求帮助！！！
已经有4人回复
- PCR鉴定与酶切鉴定
已经有11人回复
- 【求助/交流】假阳性的问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】菌液PCR鉴定阳性克隆时，总出现CK
已经有4人回复
- 【求助/交流】关于农杆菌菌液PCR
已经有13人回复
- 【求助/交流】菌液PCR结束，肉眼直接看到条带可能不？
已经有15人回复
- 【求助/交流】菌液PCR的经验
已经有6人回复
Neo2000
木虫 (著名写手)
- 应助: 639 (博士)
- 金币: 8720.2
- 红花: 37
- 帖子: 1700
- 在线: 269.3小时
- 虫号: 322365
- 注册: 2007-03-11
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2014-05-13 17:32:57
2楼2014-05-13 16:05:11
亦逐日
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1031.1
- 散金: 28
- 红花: 4
- 帖子: 264
- 在线: 48.2小时
- 虫号: 1395482
- 注册: 2011-09-08
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2014-05-13 16:18:46
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
哈皮Bingo(西门吹雪170代发): 金币+4, 鼓励回帖交流 2014-05-14 09:06:48
感谢参与，应助指数 +1
哈皮Bingo(西门吹雪170代发): 金币+4, 鼓励回帖交流 2014-05-14 09:06:48
|
跑电泳，条带有偏差很正常，原因很多，不要纠结。 我分享我的一个protocl，插入片段大于1000bp都能用。 1、连接转化后挑单克隆到500ul培养液中（用1.5mlEP管即可） 2、摇4-5h后，取80ul菌液。 3、80ul菌液+20ul裂解液（主要成分是SDS和NaOH，自己去网上着配方。可以用苯酚代替）+20ul loading buffer。 4、震荡15s，短暂离心。取20ul上清电泳。点样的时候，一定要点空质粒做对照。 一般会有4条带，从上到下依次为细菌基因组、质粒、28sRNA，18sRNA。和空质粒做对照，出现比空质粒跑的慢的带，即为阳性克隆。 5、送100ul菌液测序，订单上注明返质粒。连提质粒都省了。 |
5楼2014-05-13 18:15:41
