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关于PCR连接后菌液鉴定的问题 已有10人参与
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| PCR连接完成后，质粒转化入感受态细胞培养出单菌落后，进行菌液鉴定并跑胶，出现的条带大小是不是应该是目的片段加两引物大小？ |
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哈皮Bingo(西门吹雪170代发): 金币+4, 鼓励回帖交流 2014-05-14 09:06:48
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跑电泳，条带有偏差很正常，原因很多，不要纠结。 我分享我的一个protocl，插入片段大于1000bp都能用。 1、连接转化后挑单克隆到500ul培养液中（用1.5mlEP管即可） 2、摇4-5h后，取80ul菌液。 3、80ul菌液+20ul裂解液（主要成分是SDS和NaOH，自己去网上着配方。可以用苯酚代替）+20ul loading buffer。 4、震荡15s，短暂离心。取20ul上清电泳。点样的时候，一定要点空质粒做对照。 一般会有4条带，从上到下依次为细菌基因组、质粒、28sRNA，18sRNA。和空质粒做对照，出现比空质粒跑的慢的带，即为阳性克隆。 5、送100ul菌液测序，订单上注明返质粒。连提质粒都省了。 |
5楼2014-05-13 18:15:41
