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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR相关问题。。求指导。。谢谢
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liulugang

木虫 (小有名气)

[求助] PCR相关问题。。求指导。。谢谢 已有3人参与

想将一个77bp的启动子与3000bp片段连接。
因此，小弟准备把77bp启动子序列加在正向引物前，直接做pcr，扩增出含启动子的目的片段。

请问，这样利用近100bp的引物做pcr扩增可行吗?忘高手指导下，谢谢啦。
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1楼 2014-05-06 19:49:48
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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liulugang(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-06 22:14:13
liulugang: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-05-07 10:13:03
可以啊，只是成本有点高吧，下游引物退火高点，用扩增效率高的酶

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-05-06 20:04:51
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BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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liulugang(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-05-06 22:14:24
liulugang: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-05-07 10:13:35
你的那条引物估计都要上千。我曾经把一条穿膜肽（30个氨基酸，90个碱基）加在一个蛋白的5端，PCR没有问题。
如果你不需要精确转录的话，可以考虑针对77bp启动子设计两段引物（约50bp）（带酶切位点），中间大概（20-30bp重叠序列），做一个引物PCR就可以把你这段启动子扩增出来。然后通过酶切与你的目的基因相连。
超过60个碱基，价格算法不一样。
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3楼2014-05-06 21:47:24
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meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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liulugang: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-05-07 10:13:55
不会吧，100BP的引物要那么贵么？IDT合成90BP的引物，大概300多块钱

如果太贵，另外一个选择就是做两条引物，anneal一下，然后扩增就可以了.
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4楼2014-05-07 03:37:34
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