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liulugang

木虫 (小有名气)

[求助] PCR相关问题。。求指导。。谢谢已有3人参与

想将一个77bp的启动子与3000bp片段连接。
因此,小弟准备把77bp启动子序列加在正向引物前,直接做pcr,扩增出含启动子的目的片段。

请问,这样利用近100bp的引物做pcr扩增可行吗?忘高手指导下,谢谢啦。
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Neo2000

木虫 (著名写手)

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liulugang(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-05-06 22:14:13
liulugang: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-05-07 10:13:03
可以啊,只是成本有点高吧,下游引物退火高点,用扩增效率高的酶

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-05-06 20:04:51
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BioChen

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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liulugang: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-05-07 10:13:35
你的那条引物估计都要上千。我曾经把一条穿膜肽(30个氨基酸,90个碱基)加在一个蛋白的5端,PCR没有问题。
如果你不需要精确转录的话,可以考虑针对77bp启动子设计两段引物(约50bp)(带酶切位点),中间大概(20-30bp重叠序列),做一个引物PCR就可以把你这段启动子扩增出来。然后通过酶切与你的目的基因相连。
超过60个碱基,价格算法不一样。
3楼2014-05-06 21:47:24
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meng_xu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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liulugang: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-05-07 10:13:55
不会吧,100BP的引物要那么贵么?IDT合成90BP的引物,大概300多块钱

如果太贵,另外一个选择就是做两条引物,anneal一下,然后扩增就可以了.
4楼2014-05-07 03:37:34
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