24小时热门版块排行榜    

查看: 2338  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] PCR产物测序结果差 求分析 已有6人参与

各位大神:我之前做了个PCR,电泳结果如下图(条带从左到右依次是1、2、3、4),1、2是18S,约1kb,3、4是28S,约700bp,其中1、3是同一个DNA模板,2、4是同一个的。我看主带清晰也挺亮的,就直接送华大测序了,结果出来没有一个成功的,华大反馈的原因是:1:测序失败,峰图质量差,可信序列仅100bp;2:杂合,多位点规则套峰;3:重复序列,重复序列后峰图变乱;4:重复序列,重复序列后峰图变乱。
我想请问:1、PCR结果像我这样的,测序结果却全部失败,正常吗?会是什么原因?测序公司的问题还是我做的物种的基因问题?
                2、搞不清楚他所谓的“重复序列”是什么情况,有知道的大虾帮忙分析一下吧。
                3、像我这个情况做克隆后再测序管用吗?特别是“重复序列”的做克隆可以吗?
跪求高手指点,感激不尽!!

PCR产物测序结果差 求分析
图片1.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

越努力越幸运
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

还有就是,如果我当时让测序公司切胶后测序,各位大神觉得结果会怎么样呢?能测出来吗?
越努力越幸运
9楼2014-04-10 20:21:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-04-10 19:01:51
柠檬可乐星: 金币+3, 有帮助 2014-04-10 20:21:57
看你的结果,PCR产物中有杂带,不适于直接测序。可以切胶回收后回收产物送测序,或者再保险点连接载体测序。
2楼2014-04-10 16:11:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-10 20:21:27
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-13 18:26:53
PCR产物直接送测的话有时候因为专一性的问题是可能出现这种现象的。
1,2的反馈的话,可以做到载体,挑单克隆然后送测应该可以完成。
3,4的反馈的话,关于重复序列,测序其实是挺难的,可以让华大的分析员人工读峰图。
3楼2014-04-10 16:13:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+2 2014-04-10 20:22:10
引用回帖:
3楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-10 16:13:01
PCR产物直接送测的话有时候因为专一性的问题是可能出现这种现象的。
1,2的反馈的话,可以做到载体,挑单克隆然后送测应该可以完成。
3,4的反馈的话,关于重复序列,测序其实是挺难的,可以让华大的分析员人工读 ...

分析的很到位,最好连载体,挑单克隆测序
4楼2014-04-10 16:29:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 354求调剂 +4 Tyoumou 2026-03-18 7/350 2026-03-18 21:45 by Tyoumou
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-17 7/350 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 9/450 2026-03-18 15:31 by vgtyfty
[考研] 0854可跨调剂,一作一项核心论文五项专利,省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +7 手机用户 2026-03-17 7/350 2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-13 6/300 2026-03-18 14:14 by 脱颖而出
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 一志愿,福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 机械专硕325,寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见