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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] PCR产物测序结果差 求分析 已有6人参与

各位大神:我之前做了个PCR,电泳结果如下图(条带从左到右依次是1、2、3、4),1、2是18S,约1kb,3、4是28S,约700bp,其中1、3是同一个DNA模板,2、4是同一个的。我看主带清晰也挺亮的,就直接送华大测序了,结果出来没有一个成功的,华大反馈的原因是:1:测序失败,峰图质量差,可信序列仅100bp;2:杂合,多位点规则套峰;3:重复序列,重复序列后峰图变乱;4:重复序列,重复序列后峰图变乱。
我想请问:1、PCR结果像我这样的,测序结果却全部失败,正常吗?会是什么原因?测序公司的问题还是我做的物种的基因问题?
                2、搞不清楚他所谓的“重复序列”是什么情况,有知道的大虾帮忙分析一下吧。
                3、像我这个情况做克隆后再测序管用吗?特别是“重复序列”的做克隆可以吗?
跪求高手指点,感激不尽!!

PCR产物测序结果差 求分析
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-04-10 19:01:51
柠檬可乐星: 金币+3, 有帮助 2014-04-10 20:21:57
看你的结果,PCR产物中有杂带,不适于直接测序。可以切胶回收后回收产物送测序,或者再保险点连接载体测序。
2楼2014-04-10 16:11:03
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