24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2385  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] PCR产物测序结果差 求分析 已有6人参与

各位大神:我之前做了个PCR,电泳结果如下图(条带从左到右依次是1、2、3、4),1、2是18S,约1kb,3、4是28S,约700bp,其中1、3是同一个DNA模板,2、4是同一个的。我看主带清晰也挺亮的,就直接送华大测序了,结果出来没有一个成功的,华大反馈的原因是:1:测序失败,峰图质量差,可信序列仅100bp;2:杂合,多位点规则套峰;3:重复序列,重复序列后峰图变乱;4:重复序列,重复序列后峰图变乱。
我想请问:1、PCR结果像我这样的,测序结果却全部失败,正常吗?会是什么原因?测序公司的问题还是我做的物种的基因问题?
                2、搞不清楚他所谓的“重复序列”是什么情况,有知道的大虾帮忙分析一下吧。
                3、像我这个情况做克隆后再测序管用吗?特别是“重复序列”的做克隆可以吗?
跪求高手指点,感激不尽!!

PCR产物测序结果差 求分析
图片1.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

越努力越幸运
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-10 20:21:27
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-13 18:26:53
PCR产物直接送测的话有时候因为专一性的问题是可能出现这种现象的。
1,2的反馈的话,可以做到载体,挑单克隆然后送测应该可以完成。
3,4的反馈的话,关于重复序列,测序其实是挺难的,可以让华大的分析员人工读峰图。
3楼2014-04-10 16:13:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-04-10 19:01:51
柠檬可乐星: 金币+3, 有帮助 2014-04-10 20:21:57
看你的结果,PCR产物中有杂带,不适于直接测序。可以切胶回收后回收产物送测序,或者再保险点连接载体测序。
2楼2014-04-10 16:11:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+2 2014-04-10 20:22:10
引用回帖:
3楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-10 16:13:01
PCR产物直接送测的话有时候因为专一性的问题是可能出现这种现象的。
1,2的反馈的话,可以做到载体,挑单克隆然后送测应该可以完成。
3,4的反馈的话,关于重复序列,测序其实是挺难的,可以让华大的分析员人工读 ...

分析的很到位,最好连载体,挑单克隆测序
4楼2014-04-10 16:29:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
柠檬可乐星(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-04-10 19:02:01
柠檬可乐星: 金币+2 2014-04-10 20:22:17
一看你那图就知道不能直接测序,杂带太多,切胶回收,克隆后测序会比较好

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-04-10 19:00:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿沪9,326生物学求相关专业调剂 +3 刘墨墨 2026-04-09 3/150 2026-04-10 08:37 by 1753564080
[考研] 一志愿北理工298英一数二求调剂 +4 Reframe 2026-04-10 5/250 2026-04-10 08:27 by 紫曦紫棋
[考研] 一志愿211电子信息347求调剂 +3 554916 2026-04-03 4/200 2026-04-09 22:24 by 554916
[考研] 291求调剂 +7 关忆北. 2026-04-09 8/400 2026-04-09 15:17 by 探123
[硕博家园] 新一代电子信息294求调剂 不挑学校 +5 Ytyt11 2026-04-09 6/300 2026-04-09 14:40 by Ytyt11
[考研] 求调剂 +7 chenxrlkx 2026-04-05 9/450 2026-04-09 09:04 by wj165256
[考研] 353求调剂 +8 晴空万里air 2026-04-07 8/400 2026-04-09 00:18 by GouQ
[考研] 化学308分求调剂 +21 你好明天你好 2026-04-07 23/1150 2026-04-08 22:32 by 凯凯要变帅
[考研] 0703化学调剂 348分 +14 唉我超真没招了 2026-04-06 15/750 2026-04-08 19:16 by 我减肥1
[考研] 一志愿哈工大,初试329,求环境科学与工程调剂! +11 余未辛 2026-04-06 11/550 2026-04-08 15:21 by screening
[考研] 336材料与化工085600求调剂 +19 水星记infp 2026-04-05 22/1100 2026-04-07 21:11 by yongzhesheng
[考研] 305求调剂 +4 77Qi 2026-04-06 4/200 2026-04-07 20:06 by shanqishi
[考研] 一志愿北京化工085600 310分求调剂 +20 0856材料与化工3 2026-04-04 22/1100 2026-04-07 15:14 by 上岸快快
[考研] 信工所11408 340分 本科西安交大自动化 +3 moontrek 2026-04-06 3/150 2026-04-07 09:56 by chongya
[考研] 332求调剂 +17 小小孟... 2026-04-05 18/900 2026-04-06 09:51 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学085600英一数二337分求调剂 +12 lyz0427 2026-04-03 12/600 2026-04-06 06:37 by houyaoxu
[考研] 0835学硕299求调剂 08大类可接受 +5 useryy 2026-04-03 5/250 2026-04-04 20:07 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿沪9,求生物学调剂,326分 +6 刘墨墨 2026-04-04 6/300 2026-04-04 19:44 by 唐沐儿
[考研] 309求调剂 +4 快乐的小白鸽 2026-04-04 5/250 2026-04-04 15:55 by cql1109
[考研] 0705理学294求调剂 +3 成果成果cg5 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:04 by simons1972
信息提示
请填处理意见