应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，酶切之后，非但是没有产物，而且连原本的质粒也没跑出来
51/1返回列表
查看: 1544  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

无敌小莫

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助，酶切之后，非但是没有产物，而且连原本的质粒也没跑出来 已有1人参与

酶切之后，非但是没有产物，而且连原本的质粒也没跑出来。我用得世PET32a质粒做双酶切，体系为10*buffer tango  10微升 BamhI 2微升 X—hol 2微升 质粒 36微升。之前提了4管32a质粒，琼脂糖凝胶电泳跑胶都有非常明显的条带，可是经过37度6小时的双酶切之后，再去跑胶发现32a质粒也不见了。但是marker还是跑的很清晰，另外，我还同时做了PigC基因的双酶切也是37度切了6个小时，但是却跑出了比较暗的条带，这是和32a双酶切后质粒一起跑的，好纠结，做了两个月了，已经出现好对此32a质粒酶切之后就不见了，有时候经过纯化试剂盒纯化之后也会没有，郁闷了.....求各位大神指点，小子本科生，实在是经验少。。。求指点，金币也只有这么点，各位别嫌少啊
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-02-27 21:57:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无敌小莫

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 新人小玥 at 2014-02-27 23:02:06
胶的尽头指的是梳孔处还是跑的底部？要是底部的话，说明全部切碎了。要不就是您的质粒里存在大量的BamH I的位点，要不就是酶切反应中有其它污染。如果是梳孔处，则说明完全没切开，可能是质粒提取的质量不高，影响 ...

胶不是有打样孔吗，我说的胶的尽头指的不是打样孔那一边，这个东西已经搞了两个多月了，寒假之前也在搞，我的组员都不乐意做了，我也是没办法。。。
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-27 23:06:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

新人小玥

木虫 (正式写手)
能上个图来看看么？没了指的是泳道完全黑的，还是全部弥散？
赞一下 回复此楼
2楼2014-02-27 22:34:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无敌小莫

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 新人小玥 at 2014-02-27 22:34:49
能上个图来看看么？没了指的是泳道完全黑的，还是全部弥散？

是这样的，学校仪器不怎么好使，当时U盘插进去也没反应，我精确描述给你，PigC在将近3000bp处有暗条带，这个看起来还是很明显的，因为周围都很暗。而32a质粒则全部都是黑的。但是在胶的最尽头却是都有相当一大片的模糊亮影，和上述PigC的条带两度是一致的。32a是5000bp以上的质粒。
赞一下 回复此楼
3楼2014-02-27 22:51:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

新人小玥

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-28 11:50:12
引用回帖:
3楼: Originally posted by 无敌小莫 at 2014-02-27 22:51:27
是这样的，学校仪器不怎么好使，当时U盘插进去也没反应，我精确描述给你，PigC在将近3000bp处有暗条带，这个看起来还是很明显的，因为周围都很暗。而32a质粒则全部都是黑的。但是在胶的最尽头却是都有相当一大片的 ...

胶的尽头指的是梳孔处还是跑的底部？要是底部的话，说明全部切碎了。要不就是您的质粒里存在大量的BamH I的位点，要不就是酶切反应中有其它污染。如果是梳孔处，则说明完全没切开，可能是质粒提取的质量不高，影响了酶切。
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-27 23:02:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 材料专业求调剂 +6 hanamiko 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:24 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 冬十三 2026-03-18 5/250 2026-03-21 00:16 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:38 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +13 曦熙兮 2026-03-15 13/650 2026-03-20 19:35 by Dream007008
[考研] 材料与化工专硕调剂 +7 heming3743 2026-03-16 7/350 2026-03-20 19:31 by zhukairuo
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+4 babangida 2026-03-19 8/400 2026-03-20 15:58 by babero
[考研] 281求调剂（0805） +14 烟汐忆海 2026-03-16 25/1250 2026-03-20 15:47 by yuncha
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考！ +3 lemonzzn 2026-03-17 4/200 2026-03-20 11:04 by lemonzzn
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 生物学071000 329分求调剂 +3 我爱生物生物爱� 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:12 by macy2011
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭