24小时热门版块排行榜    

查看: 1540  |  回复: 6

无敌小莫

铜虫 (小有名气)

[求助] 求助,酶切之后,非但是没有产物,而且连原本的质粒也没跑出来 已有1人参与

酶切之后,非但是没有产物,而且连原本的质粒也没跑出来。我用得世PET32a质粒做双酶切,体系为10*buffer tango  10微升 BamhI 2微升 X—hol 2微升 质粒 36微升。之前提了4管32a质粒,琼脂糖凝胶电泳跑胶都有非常明显的条带,可是经过37度6小时的双酶切之后,再去跑胶发现32a质粒也不见了。但是marker还是跑的很清晰,另外,我还同时做了PigC基因的双酶切也是37度切了6个小时,但是却跑出了比较暗的条带,这是和32a双酶切后质粒一起跑的,好纠结,做了两个月了,已经出现好对此32a质粒酶切之后就不见了,有时候经过纯化试剂盒纯化之后也会没有,郁闷了.....求各位大神指点,小子本科生,实在是经验少。。。求指点,金币也只有这么点,各位别嫌少啊
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

新人小玥

木虫 (正式写手)

能上个图来看看么?没了指的是泳道完全黑的,还是全部弥散?
2楼2014-02-27 22:34:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无敌小莫

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 新人小玥 at 2014-02-27 22:34:49
能上个图来看看么?没了指的是泳道完全黑的,还是全部弥散?

是这样的,学校仪器不怎么好使,当时U盘插进去也没反应,我精确描述给你,PigC在将近3000bp处有暗条带,这个看起来还是很明显的,因为周围都很暗。而32a质粒则全部都是黑的。但是在胶的最尽头却是都有相当一大片的模糊亮影,和上述PigC的条带两度是一致的。32a是5000bp以上的质粒。
3楼2014-02-27 22:51:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

新人小玥

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-28 11:50:12
引用回帖:
3楼: Originally posted by 无敌小莫 at 2014-02-27 22:51:27
是这样的,学校仪器不怎么好使,当时U盘插进去也没反应,我精确描述给你,PigC在将近3000bp处有暗条带,这个看起来还是很明显的,因为周围都很暗。而32a质粒则全部都是黑的。但是在胶的最尽头却是都有相当一大片的 ...

胶的尽头指的是梳孔处还是跑的底部?要是底部的话,说明全部切碎了。要不就是您的质粒里存在大量的BamH I的位点,要不就是酶切反应中有其它污染。如果是梳孔处,则说明完全没切开,可能是质粒提取的质量不高,影响了酶切。
4楼2014-02-27 23:02:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无敌小莫

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 新人小玥 at 2014-02-27 23:02:06
胶的尽头指的是梳孔处还是跑的底部?要是底部的话,说明全部切碎了。要不就是您的质粒里存在大量的BamH I的位点,要不就是酶切反应中有其它污染。如果是梳孔处,则说明完全没切开,可能是质粒提取的质量不高,影响 ...

胶不是有打样孔吗,我说的胶的尽头指的不是打样孔那一边,这个东西已经搞了两个多月了,寒假之前也在搞,我的组员都不乐意做了,我也是没办法。。。
5楼2014-02-27 23:06:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无敌小莫

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 新人小玥 at 2014-02-27 23:02:06
胶的尽头指的是梳孔处还是跑的底部?要是底部的话,说明全部切碎了。要不就是您的质粒里存在大量的BamH I的位点,要不就是酶切反应中有其它污染。如果是梳孔处,则说明完全没切开,可能是质粒提取的质量不高,影响 ...

也许是污染了吧  真纠结 马上要考研了,这个构建菌不知道还要多久
6楼2014-02-27 23:09:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

新人小玥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-28 11:50:19
引用回帖:
5楼: Originally posted by 无敌小莫 at 2014-02-27 23:06:54
胶不是有打样孔吗,我说的胶的尽头指的不是打样孔那一边,这个东西已经搞了两个多月了,寒假之前也在搞,我的组员都不乐意做了,我也是没办法。。。...

告诉老板,买新酶,这个用不了多少钱。还有就是你提质粒时候严格按照试剂盒来,洗干净点,最后一步一定不要有乙醇残留,而且不能吹得太干。加油!
7楼2014-02-27 23:14:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 无敌小莫 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317求调剂 +7 申子申申 2026-03-19 12/600 2026-03-20 22:45 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +6 怀瑾握瑜l 2026-03-20 6/300 2026-03-20 20:30 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工专硕调剂 +7 heming3743 2026-03-16 7/350 2026-03-20 19:31 by zhukairuo
[考研] 广西大学家禽遗传育种课题组2026年硕士招生(接收计算机专业调剂) +3 123阿标 2026-03-17 3/150 2026-03-20 15:58 by 飞行琦
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +5 枫桥ZL 2026-03-18 7/350 2026-03-19 14:52 by 功夫疯狂
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 一志愿福大288有机化学,求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 280求调剂 +6 咕噜晓晓 2026-03-18 7/350 2026-03-18 11:25 by 无际的草原
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 复试调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
信息提示
请填处理意见