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帮忙看看我的SDS PAGE结果图
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黑熊1990
铁虫
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注册: 2011-12-25
性别: GG
专业: 基因组学
[
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]
帮忙看看我的SDS PAGE结果图
已有1人参与
我是新手,跑电泳也是为了赶实验,次数不多。第一张图是第一次跑,只跑了marker。第二张图是第二次跑,最左边marker少了两条
,最右边是我的纯化蛋白。第三张是第三次,同样少两条
。marker少的应该是小分子量的两条吧?第二次后用的是第一次冷冻保存的marker,会降解吗?分离胶12%,说明书上说是10-15%都行。其实我主要想知道少条带对我的结果分析没什么影响吧?
虽然搞不清楚为什么少了。请各位前辈指教。
IMG_20140215_090805.jpg
IMG_20140223_140246.jpg
IMG_20140225_102458.jpg
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1楼
2014-02-25 10:55:48
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刘堃
金虫
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虫号: 3023406
注册: 2014-03-06
性别: GG
专业: 生物化工与食品化工
我认为配制好的MARKER就应该事先分批分装 ,然后冷冻保存(-20),不冷冻保存才会加快蛋白质的降解。你那个图少条带,我估计是分离胶浓度不对,因为我以前也做过像你这样类似的,应该加大分离胶浓度,推荐汪家政编的蛋白质分离纯化手册,那里写的很详细,可以找到合适的胶浓度。
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3楼
2014-04-17 12:36:35
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小丁山
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帖子: 53
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虫号: 1099295
注册: 2010-09-15
专业: 食品科学基础
【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
第一、marker不应该冷冻保存,反复冻融会导致marker蛋白降解;第二、marker不全的话即使跑的再好也不可用,因为不完整的marker不可以说明目标蛋白的分子量,提高分离胶浓度降低电泳电压缩短时间等方法可以保留全部的marker;第三、上样量需要调整,使得纯化前后的条带有明显对比
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2楼
2014-02-27 16:20:34
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