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为你学习

铜虫 (初入文坛)

[求助] 我最近跑了一块page凝胶电泳 那位高手帮忙分析下为什么条带会出现这种问题？

我最近跑了一块page凝胶电泳  那位高手帮忙分析下为什么条带会出现这种问题？
  圆圈里的电泳道理为什么会是黑的   条带为什么有深有浅？

IMG_0326.JPG



[ Last edited by 为你学习 on 2012-11-29 at 17:49 ]
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好好学习，努力工作
1楼 2012-11-29 17:43:15
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shucanwei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请问你的样品是什么？怎么获得的？加样量多少？初步判断怀疑是样品的问题。颜色深浅是浓度大小有关。

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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
2楼2012-11-29 18:05:49
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为你学习

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shucanwei at 2012-11-29 18:05:49
请问你的样品是什么？怎么获得的？加样量多少？初步判断怀疑是样品的问题。颜色深浅是浓度大小有关。

棉花DNA 扩增玩以后上的样  上样量3ul   体系是10ul的  模板1ul buffer 1ul  上下游引物各0.5ul taq 0.5ul ddH2O6.5ul   退火温度55°  电泳电压 200v 电流400ma 跑出来就这样  会是是退火温度的问题吗？ 主要是想问为什么条带会是那么黑，不清楚。谢谢！
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好好学习，努力工作
3楼2012-11-29 18:20:46
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shucanwei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我也预到这种情况。也咨询了相关公司，原因可能是产物的浓度过大。也有可能是扩增体系中残留的酶引起的。酶为蛋白。也可能是模板浓度太高。     建议将产物纯化后稀不同浓度电泳。或就是降低模板的浓度，将模板稀释到一纳克再扩增。另外，请问您的产物预计是单一的带吗？有没有琼脂糖电泳过？

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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
4楼2012-11-30 08:25:20
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shucanwei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

还有一个关键点是银染的步骤。可能显影时间太久。你用氢氧化钠还是碳酸钠显影？

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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
5楼2012-11-30 08:28:26
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shucanwei

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

请下次点一个适合page胶的marker。

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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
6楼2012-11-30 08:30:37
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我做分子实验

铁虫 (初入文坛)
个人觉得是银染过深
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我要创业~
7楼2012-12-02 13:20:32
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huzhen1990

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

pcr循环次数过多或者模板浓度太高了
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8楼2012-12-02 18:18:49
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zhuxxshz

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

pcr循环次数过多或者模板浓度太高了,还有银染时间有点长了
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9楼2012-12-02 20:13:32
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黑白VS兔子

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by huzhen1990 at 2012-12-02 18:18:49
pcr循环次数过多或者模板浓度太高了

请问一下，您说的模板浓度太高是什么意思啊？
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10楼2013-07-24 19:03:48
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