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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手求助，有没有前辈能帮忙看一下我的SDS-PAGE胶，跑了一个多月一直这样
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msms

新虫 (小有名气)

[求助] 新手求助，有没有前辈能帮忙看一下我的SDS-PAGE胶，跑了一个多月一直这样

条带清晰的是四月份跑的胶，后面模糊的是最近一个月跑的，样品都是一样的，水稻籽粒全蛋白，不知道为什么最近跑不出来，图片在附件，我不知道怎么直接贴上来，请各位前辈帮忙看看。
新手求助，有没有前辈能帮忙看一下我的SDS-PAGE胶，跑了一个多月一直这样
1.jpg


新手求助，有没有前辈能帮忙看一下我的SDS-PAGE胶，跑了一个多月一直这样-1
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1楼 2013-07-29 09:27:47
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msms

新虫 (小有名气)
用的12%的浓度，还有我跟缓冲液煮过的样品跑出来也不清晰，反而没煮过的样品条带很清晰，请问这是怎么回事？
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2楼2013-07-29 09:30:29
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, good 2013-07-30 00:02:42
煮不煮在于蛋白的变性不同。可溶蛋白煮一下会比较好，膜蛋白煮过反而容易发生聚集，一般是不煮比较好。如果跑全蛋白，你需要根据自己的需要如何变性。条带不清晰还有可能是配胶缓冲液的pH变化了。
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3楼2013-07-29 23:45:57
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msms

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-29 23:45:57
煮不煮在于蛋白的变性不同。可溶蛋白煮一下会比较好，膜蛋白煮过反而容易发生聚集，一般是不煮比较好。如果跑全蛋白，你需要根据自己的需要如何变性。条带不清晰还有可能是配胶缓冲液的pH变化了。

缓冲液是新配的，而且同一块胶上面的条带清晰，越往下越模糊是怎么回事？
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4楼2013-07-30 09:06:21
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lloveyr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
严重怀疑新配的缓冲液出了问题
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5楼2013-07-30 09:56:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
msms: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-07-30 21:59:14
引用回帖:
4楼: Originally posted by msms at 2013-07-30 09:06:21
缓冲液是新配的，而且同一块胶上面的条带清晰，越往下越模糊是怎么回事？...

检查tris的pH. 缓冲液pH不准对小分子量区域影响更大。
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6楼2013-07-30 10:55:50
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msms

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-30 10:55:50
检查tris的pH. 缓冲液pH不准对小分子量区域影响更大。...

好的，我回去试一下，谢谢啦，因为你是最先回复的，金币给你啦！
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7楼2013-07-30 21:59:44
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msms

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lloveyr at 2013-07-30 09:56:21
严重怀疑新配的缓冲液出了问题

谢谢哦，因为已经把金币给最先回复的啦，所以sorry啦！
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8楼2013-07-30 22:00:37
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chenxiang29

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by msms at 2013-07-30 09:06:21
缓冲液是新配的，而且同一块胶上面的条带清晰，越往下越模糊是怎么回事？...

我也是越下面越模糊，你找到原因了吗？
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smile to the world
9楼2013-08-07 18:40:33
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msms

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by chenxiang29 at 2013-08-07 18:40:33
我也是越下面越模糊，你找到原因了吗？...

没有，应该不是缓冲液的问题，不知道是不是天气热，小分子蛋白降解了，跑胶时候冰浴也没有用。
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10楼2013-08-30 09:03:35
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