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黑熊1990

铁虫 (小有名气)

[求助] 帮忙看看我的SDS PAGE结果图 已有1人参与

我是新手,跑电泳也是为了赶实验,次数不多。第一张图是第一次跑,只跑了marker。第二张图是第二次跑,最左边marker少了两条,最右边是我的纯化蛋白。第三张是第三次,同样少两条。marker少的应该是小分子量的两条吧?第二次后用的是第一次冷冻保存的marker,会降解吗?分离胶12%,说明书上说是10-15%都行。其实我主要想知道少条带对我的结果分析没什么影响吧?虽然搞不清楚为什么少了。请各位前辈指教。
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小丁山

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
第一、marker不应该冷冻保存,反复冻融会导致marker蛋白降解;第二、marker不全的话即使跑的再好也不可用,因为不完整的marker不可以说明目标蛋白的分子量,提高分离胶浓度降低电泳电压缩短时间等方法可以保留全部的marker;第三、上样量需要调整,使得纯化前后的条带有明显对比
2楼2014-02-27 16:20:34
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刘堃

金虫 (正式写手)

我认为配制好的MARKER就应该事先分批分装 ,然后冷冻保存(-20),不冷冻保存才会加快蛋白质的降解。你那个图少条带,我估计是分离胶浓度不对,因为我以前也做过像你这样类似的,应该加大分离胶浓度,推荐汪家政编的蛋白质分离纯化手册,那里写的很详细,可以找到合适的胶浓度。
3楼2014-04-17 12:36:35
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