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x1989y0205z

铜虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE过程漏液已有1人参与

我最近一直做电泳,发现蛋白质条带很弥散,后来一想,是不是内槽的电泳液漏到了外槽。各位大神能帮我确定一下吗?是不是这种情况会严重的影响实验结果啊
SDS-PAGE过程漏液
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mome7

木虫 (小有名气)

试试调整进样量呢 或者你处理时间长点 不知道你用了多少那个上色 感觉你样品处理的不纯
一直坚强下去才会离幸福越来越近
2楼2013-10-25 12:05:16
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四法青云

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
karl2100: 金币+1, 3Q 2013-10-28 01:14:35
样品可能降解了
要么就是压缩的不够好
3楼2013-10-25 16:40:48
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x1989y0205z

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mome7 at 2013-10-25 12:05:16
试试调整进样量呢 或者你处理时间长点 不知道你用了多少那个上色 感觉你样品处理的不纯

我上的10μL,样品是蛋白质和多酚结合后的反应物,我点样量虽然只有10μL,但是加入到点样空的时候都几乎弥散了整个点样空,我猜这个会不会严重影响条带的迁移啊,求您多指点
加油
4楼2013-10-25 20:41:38
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x1989y0205z

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 四法青云 at 2013-10-25 16:40:48
样品可能降解了
要么就是压缩的不够好

我上样的时候是样品弥散了整个点样空,你说这会影响条带的迁移吗?求您指点
加油
5楼2013-10-25 20:43:04
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mome7

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by x1989y0205z at 2013-10-25 20:41:38
我上的10μL,样品是蛋白质和多酚结合后的反应物,我点样量虽然只有10μL,但是加入到点样空的时候都几乎弥散了整个点样空,我猜这个会不会严重影响条带的迁移啊,求您多指点...

它不是沉下去了吗 就是那种刚加进去会有一些飘起来 但是没有跑出点样孔 慢慢加吧 没几秒就沉下去稳定了啊 下面深上面浅些 不知道你说的弥散是个什么程度 我做过的就是提取的纯蛋白 高速离心了下 不过我处理时间短 就半个多小时吧(时间久记得不是太清楚) 我同学做小麦蛋白 处理半天还是大半天 然后她跑的就很好 她不知道哪里弄得方法 我参考的方法没有处理那么久的 我觉得和方法还有处理时间都有关系
一直坚强下去才会离幸福越来越近
6楼2013-10-27 10:13:25
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江南的竹

主管区长 (文学泰斗)

优秀区长优秀区长优秀区长文献杰出贡献优秀区长优秀区长文献杰出贡献文献杰出贡献文献杰出贡献优秀区长文献杰出贡献文献杰出贡献文献杰出贡献文献杰出贡献优秀版主优秀版主文献杰出贡献文献杰出贡献

【答案】应助回帖


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karl2100: 金币+1, 多谢提供! 2013-10-28 01:14:49
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  • 附件 1 : SDS-PAGE电泳过程中常见问题以及解决方法.doc
  • 2013-10-27 14:50:32, 28.5 K
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7楼2013-10-27 14:50:22
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x1989y0205z

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by mome7 at 2013-10-27 10:13:25
它不是沉下去了吗 就是那种刚加进去会有一些飘起来 但是没有跑出点样孔 慢慢加吧 没几秒就沉下去稳定了啊 下面深上面浅些 不知道你说的弥散是个什么程度 我做过的就是提取的纯蛋白 高速离心了下 不过我处理时间短  ...

您能发个电泳图我看看吗?我的蛋白质里面含有多酚,不知道有么有影响电泳,谢谢您的回复
加油
8楼2013-10-27 23:00:45
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四法青云

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by x1989y0205z at 2013-10-25 20:43:04
我上样的时候是样品弥散了整个点样空,你说这会影响条带的迁移吗?求您指点...

这个我感觉不是太大,我是做预制胶的,每天检测跑的比较多,加样也很随意,样品溢出情况都有,感觉没什么影响
9楼2013-10-28 10:36:14
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叶晓波1572

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

看你的描述  应该是loading buffer的量少了,导致样品的密度较小,点样时下沉速度慢,易扩散。试着增大loading buffer的比例。
10楼2015-03-30 15:33:21
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