| 查看: 3514 | 回复: 6 | ||
weining1203新虫 (小有名气)
|
[求助]
SDS-PAGE菌液裂解问题
|
| 想问问大侠，菌液（BL21DE3）诱导完后，取1ml离心，弃上清，那么沉淀用什么悬浮？还是不用悬浮直接加2*loading buffer 煮沸10min即可，加多少loading buffer？煮沸玩之后还要离心取上清才可以跑电泳吗?还有煮玩可以保存吗，怎么保存？本人小白，问的问题比较幼稚，请做过的同学给点经验，先谢过了 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有140人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- SDS-PAGE蛋白表达
已经有13人回复
- 关于构建pET28a载体转化后IPTG诱导跑SDS-PAGE胶问题。
已经有25人回复
- SDS-PAGE跑胶出现空带是怎么回事？
已经有2人回复
- SDS-PAGE电泳
已经有9人回复
- SDS-PAGE电泳之前应当怎样保存离心收集的菌体？
已经有17人回复
- SDS-PAGE电泳之前应当怎样保存菌体？
已经有2人回复
- 外源基因表达之后 菌液的SDS-PAGE检测时，上样缓冲液里到底要不要加PMSF
已经有5人回复
- 诱导蛋白表达 SDS-PAGE没有目的条带
已经有11人回复
- SDS-page 原核表达蛋白 电泳条带弥散
已经有6人回复
- 我的蛋白序列鉴定都是正确的，可是为什么就是不表达，是为什么呢？附SDS-PAGE图
已经有51人回复
- 原核表达后蛋白跑SDS-PAGE细节问题
已经有3人回复
- IPTG诱导表达蛋白
已经有14人回复
- 有虫友拿菌液做过Western Blot吗？
已经有2人回复
- 原核表达和SDS-PAGE
已经有9人回复
- SDS-PAGE电泳前，菌液处理后，没有上清，只是黏糊糊一坨
已经有3人回复
- 跑菌液sds-page，染色后一片空白，什么原因
已经有3人回复
- 大肠杆菌的总蛋白跑胶，怎么达到总蛋白？
已经有4人回复
- 原核表达中SDS-PAGE上样量如何确定？
已经有7人回复
- SDS-PAGE电泳，菌液总蛋白，染色后显示的是弥散的
已经有5人回复
- 【交流】生物实验小技巧－抛玉引玉(欢迎大家分享自己的经验与技巧~~)
已经有48人回复
- 【求助/交流】用于SDS-PAGE的菌液样品浓缩问题
已经有4人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-12 14:34:01
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-12 14:34:01
| 如果你想做全蛋白是可以直接加上样buffer煮的。不过样品里不仅有可溶蛋白，还有变性的包涵体蛋白。加的量要根据你的菌量多少而定，可以试一下200-400ul什么的。如果样品太浓会造成菌体裂解液粘糊糊的。煮完后需要离心上样。煮过的样品可以放在-20度保存。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
weining12032楼2012-11-12 02:29:18
weining1203
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 9.9
- 散金: 5
- 帖子: 132
- 在线: 36.4小时
- 虫号: 1728956
- 注册: 2012-03-31
- 专业: 植物遗传学
3楼2012-11-12 11:37:22
hongqifei
木虫 (小有名气)
- 应助: 47 (小学生)
- 金币: 2412.9
- 红花: 4
- 帖子: 261
- 在线: 134.5小时
- 虫号: 582655
- 注册: 2008-07-25
- 性别: GG
- 专业: 人类遗传学
4楼2012-11-12 12:07:05
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
|
用不含去垢剂的缓冲液（可以加一些盐和甘油保护蛋白）重悬细菌，超声破碎，离心后上清为可溶蛋白，包涵体和未破碎的细胞在沉淀里。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
5楼2012-11-13 07:54:17
weining1203
新虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 9.9
- 散金: 5
- 帖子: 132
- 在线: 36.4小时
- 虫号: 1728956
- 注册: 2012-03-31
- 专业: 植物遗传学
6楼2012-11-13 11:21:28
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
7楼2012-11-13 13:47:26
