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weining1203新虫 (小有名气)
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SDS-PAGE菌液裂解问题
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| 想问问大侠，菌液（BL21DE3）诱导完后，取1ml离心，弃上清，那么沉淀用什么悬浮？还是不用悬浮直接加2*loading buffer 煮沸10min即可，加多少loading buffer？煮沸玩之后还要离心取上清才可以跑电泳吗?还有煮玩可以保存吗，怎么保存？本人小白，问的问题比较幼稚，请做过的同学给点经验，先谢过了 |
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| 如果你想做全蛋白是可以直接加上样buffer煮的。不过样品里不仅有可溶蛋白，还有变性的包涵体蛋白。加的量要根据你的菌量多少而定，可以试一下200-400ul什么的。如果样品太浓会造成菌体裂解液粘糊糊的。煮完后需要离心上样。煮过的样品可以放在-20度保存。 |
weining12032楼2012-11-12 02:29:18
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【答案】应助回帖
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用不含去垢剂的缓冲液（可以加一些盐和甘油保护蛋白）重悬细菌，超声破碎，离心后上清为可溶蛋白，包涵体和未破碎的细胞在沉淀里。 |
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5楼2012-11-13 07:54:17
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