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viki_MDK

银虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌的总蛋白跑胶,怎么达到总蛋白?

要跑大肠杆菌总蛋白的SDS-page 胶,怎么样制作样品呢,从发酵的菌液开始。
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
直接含菌的发酵液加Loading Buffer煮下去跑,我都这样做的,很方面
关注我关注的
2楼2012-03-21 20:46:52
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
发酵液离心去上清,加入一定量水和Loading Buffer煮10min,点样去跑SDS-PAGE。
3楼2012-03-22 07:51:16
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
去适量发酵液,进行超声波破碎,破碎后的细胞裂解液离心,上清与loading buffer 混合就可以进行SDS-PAGE了 但注意上样浓度,不要太大
4楼2012-03-22 08:22:11
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zh10008100

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们是这样的,OD1.0然后取200ul放入Ep管内,离心,吸取上请不要,加入40

ul的2 X SDS PAGEloadingBuffer 然后金属浴96度10分钟(96度就可以使菌裂解),然后离心14000rpm十分钟,使菌碎片沉淀,上样就取上层就可以。
5楼2012-03-22 12:40:47
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