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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌的总蛋白跑胶，怎么达到总蛋白？
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viki_MDK

银虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌的总蛋白跑胶，怎么达到总蛋白？

要跑大肠杆菌总蛋白的SDS-page 胶，怎么样制作样品呢，从发酵的菌液开始。
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1楼 2012-03-21 19:41:05
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

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直接含菌的发酵液加Loading Buffer煮下去跑，我都这样做的，很方面
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2楼2012-03-21 20:46:52
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

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发酵液离心去上清，加入一定量水和Loading Buffer煮10min，点样去跑SDS-PAGE。
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3楼2012-03-22 07:51:16
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whb21

木虫 (著名写手)

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去适量发酵液，进行超声波破碎，破碎后的细胞裂解液离心，上清与loading buffer 混合就可以进行SDS-PAGE了 但注意上样浓度，不要太大
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4楼2012-03-22 08:22:11
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zh10008100

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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我们是这样的，OD1.0然后取200ul放入Ep管内，离心，吸取上请不要，加入40

ul的2 X SDS PAGEloadingBuffer 然后金属浴96度10分钟（96度就可以使菌裂解），然后离心14000rpm十分钟，使菌碎片沉淀，上样就取上层就可以。
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5楼2012-03-22 12:40:47
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