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Atlantistree铁虫 (初入文坛)
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毕赤酵母表达时的杂蛋白问题 已有2人参与
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我最近构建毕赤酵母X-33工程菌表达干扰素（20KD左右），摇瓶用BMMY表达时，蛋白很纯，没有40KD以上的蛋白，但是上罐后用基础盐离子培养基发酵后杂蛋白很多；之前还做过甘露聚糖酶（47KD左右）的表达，用基础盐离子上罐发酵时，表达蛋白很纯，没有杂蛋白。甘露聚糖酶和干扰素所用的穿梭质粒和毕赤酵母菌种完全相同，发酵工艺也相同。搞不清楚表达干扰素时，为何摇瓶表达没有杂蛋白，但是上罐后杂蛋白很多，而上罐表达甘露聚糖酶时，相同的发酵工艺，却没有杂蛋白，这种现象是由于菌体死亡造成的，还是和表达的蛋白有关？如果由于菌体自溶造成的，如何调整发酵工艺啊？求大神指点！ 附上蛋白电泳图，一张是干扰素的发酵罐表达，一张是甘露聚糖酶的发酵罐表达。  干扰素发酵罐表达.jpg  甘露聚糖酶发酵罐表达.jpg |
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是直接上的发酵上清跑的电泳；质粒用的是PICZαA；发酵过程大概是上罐后36~42小时左右甘油补料长生物量，之后是甲醇诱导，甲醇补料速度先慢后快，根据溶氧控制补料速度，溶氧控制在30%左右。干扰素序列中有一个潜在糖基化位点，但糖基化对蛋白分子量的影响应该不会特别大吧。上面干扰素电泳图中，40KD以上的都是杂蛋白，不同的泳道是不同发酵时间取的样品。干扰素这个菌种我也上过很多次罐了，都有杂蛋白，估计这杂蛋白很有可能是菌体死亡后产生的，但是发酵工艺与甘露聚糖酶的大致相同，不知为何会出现这种状况。你说的酶活性和干扰素活性都能检测出来，但是干扰素有杂蛋白，使后面的纯化还要过离子交换柱什么的，就比较麻烦。 |
6楼2014-02-02 16:04:39
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