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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 发酵液除去大分子蛋白
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ERIC20081938

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 发酵液除去大分子蛋白

最近在表达一个3kd的小肽，需要用HPLC检测，但是用毕赤酵母表达的发酵液中含有较多的杂蛋白，其中还包括培养基中的蛋白胨和酵母膏，怕对HPLC的C18柱子有伤害，有没有大侠做过类似实验，知道怎样去掉大部分的大分子杂蛋白，还能保留我的小肽呢？不胜感激···
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Flytothesky```
1楼2013-09-23 20:59:26
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tdwinner

木虫 (正式写手)
蛋白浓缩柱试试
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2楼2013-09-24 11:28:23
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kaka1045

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-09-25 16:20:58
超滤试试，或者过中空纤维
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3楼2013-09-24 13:13:11
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ERIC20081938

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tdwinner at 2013-09-24 11:28:23
蛋白浓缩柱试试

我的小肽只有3kd，没有那么小孔径的柱子呢···
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Flytothesky```
4楼2013-09-24 22:04:34
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hbchenlin

铁虫 (小有名气)
先浓缩再低温沉降，再离心和超滤
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5楼2013-10-02 09:20:43
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iamzcd

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

发酵液冷冻干燥浓缩；
浓缩液过G50，你的肽应该在后面的峰出来；
上HPLC前可以先跑个电泳看看大小，小于10000就可以上C18了。
另外既然你的蛋白是表达的，是不是可以过镍柱直接分离？
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6楼2013-11-16 10:54:13
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oldrabbit01

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以先采用纳滤去除大分子蛋白，让你的3kd的肽过滤出来；然后再用反渗透去除低分子成分，保留你的肽。或者先用等电点沉淀、盐析沉淀的方法去除大部分大分子蛋白，再纳滤效果会更好。
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7楼2013-11-16 15:22:01
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qianci2009

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

超滤试试，我们生产600d左右的核苷酸就是先用10kd超滤去除的
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8楼2013-11-17 00:29:01
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