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ERIC20081938

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 发酵液除去大分子蛋白

最近在表达一个3kd的小肽,需要用HPLC检测,但是用毕赤酵母表达的发酵液中含有较多的杂蛋白,其中还包括培养基中的蛋白胨和酵母膏,怕对HPLC的C18柱子有伤害,有没有大侠做过类似实验,知道怎样去掉大部分的大分子杂蛋白,还能保留我的小肽呢?不胜感激···
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Flytothesky```
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tdwinner

木虫 (正式写手)

蛋白浓缩柱试试
2楼2013-09-24 11:28:23
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kaka1045

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2013-09-25 16:20:58
超滤试试,或者过中空纤维
3楼2013-09-24 13:13:11
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ERIC20081938

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tdwinner at 2013-09-24 11:28:23
蛋白浓缩柱试试

我的小肽只有3kd,没有那么小孔径的柱子呢···
Flytothesky```
4楼2013-09-24 22:04:34
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hbchenlin

铁虫 (小有名气)

先浓缩再低温沉降,再离心和超滤
5楼2013-10-02 09:20:43
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iamzcd

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

发酵液冷冻干燥浓缩;
浓缩液过G50,你的肽应该在后面的峰出来;
上HPLC前可以先跑个电泳看看大小,小于10000就可以上C18了。
另外既然你的蛋白是表达的,是不是可以过镍柱直接分离?
6楼2013-11-16 10:54:13
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oldrabbit01

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以先采用纳滤去除大分子蛋白,让你的3kd的肽过滤出来;然后再用反渗透去除低分子成分,保留你的肽。或者先用等电点沉淀、盐析沉淀的方法去除大部分大分子蛋白,再纳滤效果会更好。
7楼2013-11-16 15:22:01
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qianci2009

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

超滤试试,我们生产600d左右的核苷酸就是先用10kd超滤去除的
8楼2013-11-17 00:29:01
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