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[交流]
【求助/交流】非特异性酶切
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各位虫友，我现在在做以毕赤酵母为表达载体分泌表达Ek酶，表达出的Ek酶量比较少，所以需要进行超滤浓缩，然后对标签蛋白进行酶切。 但是酶切后的电泳结果显示融合蛋白被切碎了，（切下的目的蛋白因分子量较小没有检测到，且目的蛋白没有活性），我们选择了23度和37度比较，结果也都是切碎了。 这种情况可能是什么原因造成的呢？有没有可能是酵母发酵过程中的代谢产物？抑或酵母自身细胞破碎导致胞内有活性的杂蛋白释放出来？想了好久还是不知道问题出在哪里，实验很长时间了都进行不下去，很是着急，请各位虫友帮忙解答！谢谢 |
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