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ytficfuu

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于southern杂交非特异性杂交的问题 已有3人参与

各位大虾,小弟近日正在做southern杂交,主要是看基因组中一个基因的拷贝数。大致流程如下:基因组酶切过夜--电泳(40V,3h)--真空转膜(5ih,1.5h)--紫外交联(1.2kj/cm,240s)--采用罗氏试剂盒标记显影。探针标记用的是随机引物标记法。
但是每次曝光出来的结果,经酶切后的样品经标记显色后,几乎全部都杂交上了,跟酶切后跑电泳看到的效果差不多,探针与阴性对照并不杂交。请各位大虾多多指教!
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shaquila

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼主,上图吧,阴性对照是什么
2楼2011-03-24 21:54:49
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)

LZ探针多长?
3楼2011-03-25 08:45:38
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ytficfuu

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-03-24 21:54:49:
楼主,上图吧,阴性对照是什么

找同学要的T载质粒,同时还有MarkerIII,这两个都没有条带,非常干净。
4楼2011-03-25 14:22:41
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ytficfuu

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 阿修罗Axuro at 2011-03-25 08:45:38:
LZ探针多长?

400bp,PCR条带很单一,而且做了胶回收。
5楼2011-03-25 14:24:15
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shaquila

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+1): 鼓励 2011-03-25 21:35:46
lz你是做转基因验证吗,如果是,那要用WT做对照~
6楼2011-03-25 14:54:56
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ytficfuu

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-03-25 14:54:56:
lz你是做转基因验证吗,如果是,那要用WT做对照~

不是,是本来就有的基因
7楼2011-03-25 20:06:33
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shaquila

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有阳性质粒做对照吗,这个探针有搜索过特异性吗,杂交温度是不是有问题?
8楼2011-03-25 21:09:04
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是多少度杂交的?40几度还是60几度?
9楼2011-03-25 22:24:19
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