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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】关于southern杂交非特异性杂交的问题
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ytficfuu

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于southern杂交非特异性杂交的问题 已有3人参与

各位大虾，小弟近日正在做southern杂交，主要是看基因组中一个基因的拷贝数。大致流程如下：基因组酶切过夜--电泳（40V，3h)--真空转膜(5ih,1.5h)--紫外交联（1.2kj/cm,240s)--采用罗氏试剂盒标记显影。探针标记用的是随机引物标记法。
但是每次曝光出来的结果，经酶切后的样品经标记显色后，几乎全部都杂交上了，跟酶切后跑电泳看到的效果差不多，探针与阴性对照并不杂交。请各位大虾多多指教！
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1楼 2011-03-24 20:36:23
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shaquila

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主，上图吧，阴性对照是什么
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2楼2011-03-24 21:54:49
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
LZ探针多长？
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3楼2011-03-25 08:45:38
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ytficfuu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-03-24 21:54:49:
楼主，上图吧，阴性对照是什么

找同学要的T载质粒，同时还有MarkerIII，这两个都没有条带，非常干净。
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4楼2011-03-25 14:22:41
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ytficfuu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 阿修罗Axuro at 2011-03-25 08:45:38:
LZ探针多长？

400bp，PCR条带很单一，而且做了胶回收。
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5楼2011-03-25 14:24:15
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shaquila

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1): 鼓励 2011-03-25 21:35:46
lz你是做转基因验证吗，如果是，那要用WT做对照~
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6楼2011-03-25 14:54:56
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ytficfuu

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shaquila at 2011-03-25 14:54:56:
lz你是做转基因验证吗，如果是，那要用WT做对照~

不是，是本来就有的基因
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7楼2011-03-25 20:06:33
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shaquila

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有阳性质粒做对照吗，这个探针有搜索过特异性吗，杂交温度是不是有问题？
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8楼2011-03-25 21:09:04
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阿修罗Axuro

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是多少度杂交的？40几度还是60几度？
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9楼2011-03-25 22:24:19
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