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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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dongfei_168

木虫 (初入文坛)

[求助] 基因组酶切问题!急!

为了做southern单酶切基因组,但是就是切不开!各种方法都用了!4度预混buffer和基因组一夜,加一半酶切12小时,之后再加一半酶。但是这样酶切也不完全!直接加更加切不开!有没有高手啊?帮帮忙!
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huahu3600

新虫 (小有名气)


gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-12-09 14:38:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by dongfei_168 at 2013-12-06 17:24:52
50倍过量是什么意思啊?我用的是NEB的酶,之前的体系是100微升,5微升酶,10微克的基因组,切了两天也不是很完全。...

1U的酶对应1ug的DNA.
50倍过量嘛,50U的酶对应1ug的DNA.
加的时候,不要只看体积,几微升什么的,还要看浓度,1ul里面有多少U的酶。
另外,你选的NEB什么酶?
4楼2013-12-09 14:03:12
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huahu3600

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-06 23:50:42
dongfei_168: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-16 17:05:12
基因组比较大,难切。
50倍过量,先切4-5小时,然后,补加酶,酶切过夜。
其实,只要大部分切开就可以。
选酶也是重要。
2楼2013-12-06 15:21:56
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dongfei_168

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-12-06 15:21:56
基因组比较大,难切。
50倍过量,先切4-5小时,然后,补加酶,酶切过夜。
其实,只要大部分切开就可以。
选酶也是重要。

50倍过量是什么意思啊?我用的是NEB的酶,之前的体系是100微升,5微升酶,10微克的基因组,切了两天也不是很完全。
3楼2013-12-06 17:24:52
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dongfei_168

木虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-12-09 14:03:12
1U的酶对应1ug的DNA.
50倍过量嘛,50U的酶对应1ug的DNA.
加的时候,不要只看体积,几微升什么的,还要看浓度,1ul里面有多少U的酶。
另外,你选的NEB什么酶?...

hind3的HF酶~~~
5楼2013-12-09 16:46:49
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