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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因组酶切问题！急！
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dongfei_168

木虫 (初入文坛)

[求助] 基因组酶切问题！急！

为了做southern单酶切基因组，但是就是切不开！各种方法都用了！4度预混buffer和基因组一夜，加一半酶切12小时，之后再加一半酶。但是这样酶切也不完全！直接加更加切不开！有没有高手啊？帮帮忙！
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1楼 2013-12-06 14:35:55
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huahu3600

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-06 23:50:42
dongfei_168: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-16 17:05:12
基因组比较大，难切。
50倍过量，先切4-5小时，然后，补加酶，酶切过夜。
其实，只要大部分切开就可以。
选酶也是重要。
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2楼2013-12-06 15:21:56
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dongfei_168

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-12-06 15:21:56
基因组比较大，难切。
50倍过量，先切4-5小时，然后，补加酶，酶切过夜。
其实，只要大部分切开就可以。
选酶也是重要。

50倍过量是什么意思啊？我用的是NEB的酶，之前的体系是100微升，5微升酶，10微克的基因组，切了两天也不是很完全。
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3楼2013-12-06 17:24:52
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huahu3600

新虫 (小有名气)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-09 14:38:58
引用回帖:
3楼: Originally posted by dongfei_168 at 2013-12-06 17:24:52
50倍过量是什么意思啊？我用的是NEB的酶，之前的体系是100微升，5微升酶，10微克的基因组，切了两天也不是很完全。...

1U的酶对应1ug的DNA.
50倍过量嘛，50U的酶对应1ug的DNA.
加的时候，不要只看体积，几微升什么的，还要看浓度，1ul里面有多少U的酶。
另外，你选的NEB什么酶？
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4楼2013-12-09 14:03:12
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dongfei_168

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-12-09 14:03:12
1U的酶对应1ug的DNA.
50倍过量嘛，50U的酶对应1ug的DNA.
加的时候，不要只看体积，几微升什么的，还要看浓度，1ul里面有多少U的酶。
另外，你选的NEB什么酶？...

hind3的HF酶~~~
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5楼2013-12-09 16:46:49
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huahu3600

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by dongfei_168 at 2013-12-09 16:46:49
hind3的HF酶~~~...

这个酶应该很好切的。
你还是注意一下基因组酶切过量的问题，5ul是肯定不够的。
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6楼2013-12-10 12:47:27
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hqq6969

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-12-06 15:21:56
基因组比较大，难切。
50倍过量，先切4-5小时，然后，补加酶，酶切过夜。
其实，只要大部分切开就可以。
选酶也是重要。

请问你的酶切是37度酶切吗
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7楼2015-01-06 16:07:21
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hqq6969

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-12-10 12:47:27
这个酶应该很好切的。
你还是注意一下基因组酶切过量的问题，5ul是肯定不够的。...

请问一下你的酶切条件是37℃吗
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8楼2015-01-06 16:09:34
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