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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » NotI酶切基因组DNA
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xuzhu598

铁虫 (小有名气)

[求助] NotI酶切基因组DNA

有哪位大侠知道为什么用NotI或AscI切基因组DNA总是切不开，不能产生smear，加大酶的用量和改变体系仍是切不开？有谁用过这两种酶切genomic DNA的啊？急求帮助，谢谢！
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1楼 2013-07-16 17:58:51
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huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-17 12:45:37
首先，确保NotI反应体系没有错，其次，DNA要求比较干净。因为NotI活力不是很高，另外NotI是识别8个碱基GCGGCCGC的
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2楼2013-07-17 10:56:07
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xuzhu598

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huanghznd at 2013-07-17 10:56:07
首先，确保NotI反应体系没有错，其次，DNA要求比较干净。因为NotI活力不是很高，另外NotI是识别8个碱基GCGGCCGC的

那请问你们都是用什么方法提取的基因组DNA啊，我是用酚氯仿方法提取的，这样不行吗？
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3楼2013-07-17 12:37:24
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huanghznd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xuzhu598 at 2013-07-17 12:37:24
那请问你们都是用什么方法提取的基因组DNA啊，我是用酚氯仿方法提取的，这样不行吗？...

我也是用这个方法提取，建议抽提两次后，再用氯仿抽提一次。还有一点是可以做一个加入DNA量的梯度试试。
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4楼2013-07-17 12:40:51
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xuzhu598

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by huanghznd at 2013-07-17 12:40:51
我也是用这个方法提取，建议抽提两次后，再用氯仿抽提一次。还有一点是可以做一个加入DNA量的梯度试试。...

DNA量做了好多个，体系也改变了几次，仍是切不开，请问你用NotI切开了？总是切不开，急求帮助啊
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5楼2013-07-17 13:31:41
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huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by xuzhu598 at 2013-07-17 13:31:41
DNA量做了好多个，体系也改变了几次，仍是切不开，请问你用NotI切开了？总是切不开，急求帮助啊...

如果是这样，那为什么不换一下酶呢？每个基因组都有区别
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6楼2013-07-17 13:43:06
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