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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何获得一个酶的基因
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jessica2010

新虫 (小有名气)

[求助] 如何获得一个酶的基因

我自己分离了一株菌，纯化得到了一个酶，请问各分子生物学高手，如何获得这个酶的基因？
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1楼 2012-02-22 06:57:10
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2, 专家考核): 学习了，呵呵 2012-02-22 13:34:14
jessica2010(金币+1): ★★★★★最佳答案 2012-02-22 16:53:16
西瓜(金币+4, MolEPI+1, 专家考核): Good！ 2012-02-22 18:45:34
纯化得到酶后：
（1）如果是来源于原核生物进行N/C端氨基酸测序，然后根据两端的氨基酸序列设计兼并引物，PCR扩增获得编码基因。
（2）如果是来源于真核生物进行N端氨基酸测序即可，然后根据N端的氨基酸序列设计一条兼并引物，polyA尾巴设计另外一条引物，RTPCR扩增获得编码基因。
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jessica2010 jessica2010
3楼2012-02-22 09:40:39
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jessica2010

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by lxj341401 at 2012-02-22 09:40:39:
纯化得到酶后：
（1）如果是来源于原核生物进行N/C端氨基酸测序，然后根据两端的氨基酸序列设计兼并引物，PCR扩增获得编码基因。
（2）如果是来源于真核生物进行N端氨基酸测序即可，然后根据N端的氨基酸序列设计 ...

请问国内做氨基酸测序比较专业的公司有哪些？
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5楼2012-02-22 16:57:05
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普通回帖

power5

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
jessica2010(金币+4): ★★★很有帮助 很好 2012-02-22 16:52:23
当然是蛋白测序阿
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2楼2012-02-22 09:29:04
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jessica2010

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by lxj341401 at 2012-02-22 09:40:39:
纯化得到酶后：
（1）如果是来源于原核生物进行N/C端氨基酸测序，然后根据两端的氨基酸序列设计兼并引物，PCR扩增获得编码基因。
（2）如果是来源于真核生物进行N端氨基酸测序即可，然后根据N端的氨基酸序列设计 ...

不好意思，原想送５个金币的，没想到給了上个帖子４个金币后，系统只允许給一个金币了．
另外想问问国内哪家公司对原核生物进行N/C端氨基酸测序比较专业？　
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4楼2012-02-22 16:55:10
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wanggl2004

木虫 (著名写手)
把纯化的蛋白电泳后，挖下来，找公司去打质谱，然后得到的结果到NCBI里面blast，看跟已经登陆的序列有没有相近的，然后再做下一步！
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思考是行动的种子！
6楼2012-02-23 14:38:36
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