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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 如何克隆一个在小鼠、大鼠中序列已知，但在人未知的基因？
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hs2451

木虫 (正式写手)

[求助] 如何克隆一个在小鼠、大鼠中序列已知，但在人未知的基因？

RT，请教各位大侠，用神马方法啊？
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中国是不朽的
1楼 2011-11-23 15:49:36
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回帖置顶 ( 共有1个 )

凡子1985

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流！对于两个序列都知道的物种，先用生物信息学的方法比对，省时省力。如果基因不大，用基因组DNA也可以了，cDNA涉及RNA提取和反转录，要麻烦些，成本也高些。 2011-11-23 20:44:16
wanhscn(金币+6, MolEPI+1): 完全正确，以cDNA模板为先，后再拿基因组序列，因为有可能内含子很大！授予专家指数！ 2011-11-25 12:01:49
引用回帖:
4楼: Originally posted by hs2451 at 2011-11-23 17:08:17:
谢谢您！还想请教下，可不可以分别将大小鼠的这个基因与人类的全基因组进行比对呢，这样能不能找出人类中的这个基因啊？或者，可以将大小鼠的同源性序列与人类基因组比对从而得到结果吗？麻烦了！

2楼是错误的  但凡能PCR出来的 你用序列比对 做电子克隆 就都知道了 何必去做这个实验呢  那都是后续的事情 你首先要做的 是比对出可能的序列来 而且 后续也不是以染色体基因组为模版 而是以cDNA为模版
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6楼2011-11-23 19:55:39
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普通回帖

hs2451

木虫 (正式写手)
肿么木有大侠帮忙啊？
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中国是不朽的
2楼2011-11-23 16:30:20
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good! 2011-11-23 20:38:47
hs2451(金币+5): 谢谢帮助 2011-11-23 21:57:23
比较小鼠和大鼠中该基因的同源性，根据同源区设计引物，以人染色体为模板扩增获得该基因的部分片段，测序后做RACE获得全长基因。
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3楼2011-11-23 16:52:37
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hs2451

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-11-23 16:52:37:
比较小鼠和大鼠中该基因的同源性，根据同源区设计引物，以人染色体为模板扩增获得该基因的部分片段，测序后做RACE获得全长基因。

谢谢您！还想请教下，可不可以分别将大小鼠的这个基因与人类的全基因组进行比对呢，这样能不能找出人类中的这个基因啊？或者，可以将大小鼠的同源性序列与人类基因组比对从而得到结果吗？麻烦了！
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中国是不朽的
4楼2011-11-23 17:08:17
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凡子1985

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-11-23 20:41:06
引用回帖:
4楼: Originally posted by hs2451 at 2011-11-23 17:08:17:
谢谢您！还想请教下，可不可以分别将大小鼠的这个基因与人类的全基因组进行比对呢，这样能不能找出人类中的这个基因啊？或者，可以将大小鼠的同源性序列与人类基因组比对从而得到结果吗？麻烦了！

首先必须这么做 省时省力  但结果不会太好 因为现在这些基因组都有了 能blast出来的基因  也轮不到你了 不过可以试一下 who knows
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5楼2011-11-23 19:25:03
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hs2451

木虫 (正式写手)
谢谢两位大侠以及版主的回答 明白了
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中国是不朽的
7楼2011-11-23 22:00:08
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lee.walker

木虫 (正式写手)
★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-11-24 21:21:37
电子克隆(in silico cloning)方法，用已知基因在人全基因组中搜索，调出相关基因，然后实验方面用RT-PCR验证即可。
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8楼2011-11-24 08:18:57
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hs2451

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lee.walker at 2011-11-24 08:18:57:
电子克隆(in silico cloning)方法，用已知基因在人全基因组中搜索，调出相关基因，然后实验方面用RT-PCR验证即可。

嗯 谢谢 现在明白了
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中国是不朽的
9楼2011-11-24 09:24:50
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lixingliang

新虫 (小有名气)
★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励交流 2011-11-25 12:04:16
大鼠和人的基因同源性一般很高的，可以采用设计兼并引物的方法扩增出目的基因，然后采用快速末端扩增方法得到基因全长（RACE），买个试剂盒就OK，最后送公司测序。
此外，还可以提交到pubmed上，作为这个新基因的发现者。
祝好运
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我不管你看起看不起我，我都是个演员
10楼2011-11-25 08:41:15
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