| 查看: 2162 | 回复: 15 | ||
[求助]
大家帮我看看啊，我做的酶切反应到底是怎么回事呢？急急急！
|
|
这是我酶切的电泳图，用的是全基因组DNA，反应体系如下（体系是参考别人的）：我想得到的是200-1000bp左右的片段 Genomic DNA 20μl (5-6μg) 10×enzyme buffer 5μl (终浓度1×) Sau3AI 2μl（10U/μl） ddH2O 23μl Total Volume 50μl 然后 37℃酶切2-3hr，结果就是这样了，这是我没纯化的总DNA做的，我纯化后做的更是一点条带都没有，到底是怎么回事啊？  |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有269人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- （侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略
已经有89人回复
- 请各位大侠帮我看看这个关于ATRP反应怎么做，有没有必要这样做。谢谢。
已经有3人回复
- 求助：重组质粒酶切问题！请大家帮我解决一下，急！
已经有7人回复
- Sau 3AI 酶切DNA片段 无带怎么回事？
已经有7人回复
- 双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点
已经有52人回复
- 求助！请问 NdeI 和EcoRI 同时做酶切可以吗？
已经有3人回复
- 为什么我做的酶切连接总是不长斑呢？
已经有24人回复
- PCR是阳性但酶切是阴性，怎么回事？
已经有10人回复
- 【求助】大家帮我看看这个反应的合成条件啊 急
已经有4人回复
- 【求助】大家帮我看看反应的第一步第二步是什么机理，谢谢了。
已经有17人回复
- 【求助/交流】ECORI酶切反应体系体积可加大吗
已经有6人回复
- 【问题反馈】质粒双酶切切下120bp每次都看不到？
已经有21人回复
hongqifei
木虫 (小有名气)
- 应助: 47 (小学生)
- 金币: 2412.9
- 红花: 4
- 帖子: 261
- 在线: 134.5小时
- 虫号: 582655
- 注册: 2008-07-25
- 性别: GG
- 专业: 人类遗传学
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-07 22:52:43
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-07 22:52:43
| DNA全都降解了。先确认一下是不是DNA本身已经降解，再看看内切酶或反应体系有没有问题。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
weiguo2889
2楼2012-06-07 11:52:07
3楼2012-06-07 12:04:51
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-08 13:51:14
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-08 13:51:14
| 你的这个结果好像是酶切出来。建议首先检测DNA，然后用不存在讲解问题的再做一下，还有在考虑是不是酶的添加量有问题 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
4楼2012-06-07 14:04:42
5楼2012-06-07 15:01:08
6楼2012-06-07 21:53:53
elbo
金虫 (小有名气)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 1003.7
- 散金: 468
- 红花: 2
- 帖子: 231
- 在线: 119.9小时
- 虫号: 954540
- 注册: 2010-02-10
- 性别: GG
- 专业: 微生物生态学
| 建议酶切之前GDNA进行纯化，另外酶切时间弄到3小时以上，生工的酶是进口分装的，他们的说明书 很粗糙，用的时候打了很多电话。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
7楼2012-06-08 07:19:44
suifeng91
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 55 (初中生)
- 金币: 2248.9
- 帖子: 256
- 在线: 134.5小时
- 虫号: 1327256
- 注册: 2011-06-20
- 专业: 抗体工程学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
建议如下： 1、应该加一个没有酶切的基因组DNA样品； 2、Sau3AI 是四碱基识别内切酶，所以理论上256bp就有一个酶切位点。部分酶切的时候酶量及酶切时间要优化。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
8楼2012-06-08 14:55:37
9楼2012-06-09 00:44:16
10楼2012-06-09 00:44:36
