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大家帮我看看啊，我做的酶切反应到底是怎么回事呢？急急急！
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这是我酶切的电泳图，用的是全基因组DNA，反应体系如下（体系是参考别人的）：我想得到的是200-1000bp左右的片段 Genomic DNA 20μl (5-6μg) 10×enzyme buffer 5μl (终浓度1×) Sau3AI 2μl（10U/μl） ddH2O 23μl Total Volume 50μl 然后 37℃酶切2-3hr，结果就是这样了，这是我没纯化的总DNA做的，我纯化后做的更是一点条带都没有，到底是怎么回事啊？  |
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hongqifei
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| DNA全都降解了。先确认一下是不是DNA本身已经降解，再看看内切酶或反应体系有没有问题。 |
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weiguo2889
2楼2012-06-07 11:52:07
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| 你的这个结果好像是酶切出来。建议首先检测DNA，然后用不存在讲解问题的再做一下，还有在考虑是不是酶的添加量有问题 |
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| 建议酶切之前GDNA进行纯化，另外酶切时间弄到3小时以上，生工的酶是进口分装的，他们的说明书 很粗糙，用的时候打了很多电话。 |
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7楼2012-06-08 07:19:44
suifeng91
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建议如下： 1、应该加一个没有酶切的基因组DNA样品； 2、Sau3AI 是四碱基识别内切酶，所以理论上256bp就有一个酶切位点。部分酶切的时候酶量及酶切时间要优化。 |
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