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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家帮我看看啊，我做的酶切反应到底是怎么回事呢？急急急！
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weiguo2889

木虫 (小有名气)

[求助] 大家帮我看看啊，我做的酶切反应到底是怎么回事呢？急急急！

这是我酶切的电泳图，用的是全基因组DNA，反应体系如下（体系是参考别人的）：我想得到的是200-1000bp左右的片段         
            Genomic DNA            20μl (5-6μg)
            10×enzyme buffer    5μl (终浓度1×)
             Sau3AI                      2μl（10U/μl）
             ddH2O                       23μl         
             Total Volume        50μl
然后 37℃酶切2-3hr，结果就是这样了，这是我没纯化的总DNA做的，我纯化后做的更是一点条带都没有，到底是怎么回事啊？
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1楼 2012-06-07 11:40:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elbo

金虫 (小有名气)
建议酶切之前GDNA进行纯化，另外酶切时间弄到3小时以上，生工的酶是进口分装的，他们的说明书 很粗糙，用的时候打了很多电话。
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weiguo2889
7楼2012-06-08 07:19:44
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hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-07 22:52:43
DNA全都降解了。先确认一下是不是DNA本身已经降解，再看看内切酶或反应体系有没有问题。
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weiguo2889
何须剑道争锋？千人指，万人封，可问江湖鼎峰，三尺秋水尘不染，天下无双。
2楼2012-06-07 11:52:07
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weiguo2889

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hongqifei at 2012-06-07 11:52:07
DNA全都降解了。先确认一下是不是DNA本身已经降解，再看看内切酶或反应体系有没有问题。

但是我检测了提出的gDNA的啊，虽然有部分降解，但是还是有完整的，我觉得全部降解应该不是很可能吧，哎，这个反应体系是参考的别人博士论文里面的方法，内切酶也是在生工订的
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3楼2012-06-07 12:04:51
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一申二心

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-08 13:51:14
你的这个结果好像是酶切出来。建议首先检测DNA，然后用不存在讲解问题的再做一下，还有在考虑是不是酶的添加量有问题
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weiguo2889
4楼2012-06-07 14:04:42
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查看全部 16 个回答
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