24小时热门版块排行榜    

查看: 2459  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

weiguo2889

木虫 (小有名气)

[求助] 大家帮我看看啊,我做的酶切反应到底是怎么回事呢?急急急!

这是我酶切的电泳图,用的是全基因组DNA,反应体系如下(体系是参考别人的):我想得到的是200-1000bp左右的片段         
            Genomic DNA            20μl (5-6μg)
            10×enzyme buffer    5μl (终浓度1×)
             Sau3AI                      2μl(10U/μl)
             ddH2O                       23μl         
             Total Volume        50μl
然后 37℃酶切2-3hr,结果就是这样了,这是我没纯化的总DNA做的,我纯化后做的更是一点条带都没有,到底是怎么回事啊?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiguo2889

木虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by elbo at 2012-06-08 07:19:44
建议酶切之前GDNA进行纯化,另外酶切时间弄到3小时以上,生工的酶是进口分装的,他们的说明书 很粗糙,用的时候打了很多电话。

谢谢你了,呵呵~
10楼2012-06-09 00:44:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-07 22:52:43
DNA全都降解了。先确认一下是不是DNA本身已经降解,再看看内切酶或反应体系有没有问题。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

何须剑道争锋?千人指,万人封,可问江湖鼎峰,三尺秋水尘不染,天下无双。
2楼2012-06-07 11:52:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiguo2889

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hongqifei at 2012-06-07 11:52:07
DNA全都降解了。先确认一下是不是DNA本身已经降解,再看看内切酶或反应体系有没有问题。

但是我检测了提出的gDNA的啊,虽然有部分降解,但是还是有完整的,我觉得全部降解应该不是很可能吧,哎,这个反应体系是参考的别人博士论文里面的方法,内切酶也是在生工订的
3楼2012-06-07 12:04:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一申二心

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-08 13:51:14
你的这个结果好像是酶切出来。建议首先检测DNA,然后用不存在讲解问题的再做一下,还有在考虑是不是酶的添加量有问题

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2012-06-07 14:04:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
请填处理意见