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dongfei_168

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[求助] 基因组酶切问题！急！

为了做southern单酶切基因组，但是就是切不开！各种方法都用了！4度预混buffer和基因组一夜，加一半酶切12小时，之后再加一半酶。但是这样酶切也不完全！直接加更加切不开！有没有高手啊？帮帮忙！

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1楼 2013-12-06 14:35:55

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huahu3600

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-06 23:50:42
dongfei_168: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-16 17:05:12

基因组比较大，难切。
50倍过量，先切4-5小时，然后，补加酶，酶切过夜。
其实，只要大部分切开就可以。
选酶也是重要。

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2楼2013-12-06 15:21:56

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dongfei_168

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引用回帖:

2楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-12-06 15:21:56
基因组比较大，难切。
50倍过量，先切4-5小时，然后，补加酶，酶切过夜。
其实，只要大部分切开就可以。
选酶也是重要。

50倍过量是什么意思啊？我用的是NEB的酶，之前的体系是100微升，5微升酶，10微克的基因组，切了两天也不是很完全。

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3楼2013-12-06 17:24:52

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huahu3600

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gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-09 14:38:58

引用回帖:

3楼: Originally posted by dongfei_168 at 2013-12-06 17:24:52
50倍过量是什么意思啊？我用的是NEB的酶，之前的体系是100微升，5微升酶，10微克的基因组，切了两天也不是很完全。...

1U的酶对应1ug的DNA.
50倍过量嘛，50U的酶对应1ug的DNA.
加的时候，不要只看体积，几微升什么的，还要看浓度，1ul里面有多少U的酶。
另外，你选的NEB什么酶？

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4楼2013-12-09 14:03:12

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dongfei_168

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引用回帖:

4楼: Originally posted by huahu3600 at 2013-12-09 14:03:12
1U的酶对应1ug的DNA.
50倍过量嘛，50U的酶对应1ug的DNA.
加的时候，不要只看体积，几微升什么的，还要看浓度，1ul里面有多少U的酶。
另外，你选的NEB什么酶？...

hind3的HF酶~~~

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5楼2013-12-09 16:46:49

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