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子潇杨帆

金虫 (初入文坛)

[求助] 诚心求教各位前辈:筛选扩增体系时的PCR图片,这是怎么回事啊?

紧急求教各位前辈:
刚开始做SCoT分子标记对玫瑰的最优扩增体系的筛选,刚刚开始跑PCR(普通的),结果结果成了这样,弥散的好厉害,尤其是第二次跑的这次,连marker都看不清楚,像重影似的,请教各位前辈能否给以指点,诚心求教出现这种情况的原因是什么,我该怎么解决啊???
我的扩增程序设定的为:94℃预变性 5 min;94℃变性 1 min,50℃退火 1 min,72℃ 延伸 2 min,共 36 个循环;72℃最后延伸 10 min。
诚心求教各位前辈:筛选扩增体系时的PCR图片,这是怎么回事啊?
11-7(筛)_副本.jpg


诚心求教各位前辈:筛选扩增体系时的PCR图片,这是怎么回事啊?-1
11-7(筛2)_副本.jpg
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wanghx_2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
请你把电泳的条件列出来,包括电压,胶浓度,电泳时间,电流大小,再作分析。
3楼2013-11-08 13:52:42
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
marker都出现弥散了,只有两种原因:1,你的marker质量出现问题。2,你的凝胶分辨率太高,将marker都给分辨了。但是第一个问题一般不会出现,所以应该是凝胶的分辨率太高,电压和胶浓度都有影响,稍微降低一下胶的浓度可以改观。
我不会!
2楼2013-11-08 11:01:21
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子潇杨帆

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wanghx_2012 at 2013-11-08 13:52:42
请你把电泳的条件列出来,包括电压,胶浓度,电泳时间,电流大小,再作分析。

电泳条件:电压120,电流190,功率40;2%琼脂糖凝胶;电泳时间我一般以电泳的条带跑到整个胶块的3/4处停止,如果是大胶的话一个多小时吧,如果是大胶的一半就大约40分钟~50分钟。希望前辈给予指点~~
4楼2013-11-08 15:10:32
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子潇杨帆

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 三蛰 at 2013-11-08 11:01:21
marker都出现弥散了,只有两种原因:1,你的marker质量出现问题。2,你的凝胶分辨率太高,将marker都给分辨了。但是第一个问题一般不会出现,所以应该是凝胶的分辨率太高,电压和胶浓度都有影响,稍微降低一下胶的浓 ...

我用的胶浓度为2%的,我会尝试一下降低胶的浓度,十分感谢!
5楼2013-11-08 15:11:40
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