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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 诚心求教各位前辈：筛选扩增体系时的PCR图片，这是怎么回事啊？
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子潇杨帆

金虫 (初入文坛)

[求助] 诚心求教各位前辈：筛选扩增体系时的PCR图片，这是怎么回事啊？

紧急求教各位前辈：
刚开始做SCoT分子标记对玫瑰的最优扩增体系的筛选，刚刚开始跑PCR（普通的），结果结果成了这样，弥散的好厉害，尤其是第二次跑的这次，连marker都看不清楚，像重影似的，请教各位前辈能否给以指点，诚心求教出现这种情况的原因是什么，我该怎么解决啊？？？
我的扩增程序设定的为：94℃预变性 5 min；94℃变性 1 min，50℃退火 1 min，72℃ 延伸 2 min，共 36 个循环；72℃最后延伸 10 min。
诚心求教各位前辈：筛选扩增体系时的PCR图片，这是怎么回事啊？
11-7（筛）_副本.jpg


诚心求教各位前辈：筛选扩增体系时的PCR图片，这是怎么回事啊？-1
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1楼 2013-11-07 20:26:09
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子潇杨帆

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wanghx_2012 at 2013-11-08 13:52:42
请你把电泳的条件列出来，包括电压，胶浓度，电泳时间，电流大小，再作分析。

电泳条件：电压120，电流190，功率40；2%琼脂糖凝胶；电泳时间我一般以电泳的条带跑到整个胶块的3/4处停止，如果是大胶的话一个多小时吧，如果是大胶的一半就大约40分钟~50分钟。希望前辈给予指点~~
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4楼2013-11-08 15:10:32
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
marker都出现弥散了，只有两种原因：1，你的marker质量出现问题。2，你的凝胶分辨率太高，将marker都给分辨了。但是第一个问题一般不会出现，所以应该是凝胶的分辨率太高，电压和胶浓度都有影响，稍微降低一下胶的浓度可以改观。
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我不会！
2楼2013-11-08 11:01:21
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wanghx_2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请你把电泳的条件列出来，包括电压，胶浓度，电泳时间，电流大小，再作分析。
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3楼2013-11-08 13:52:42
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子潇杨帆

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 三蛰 at 2013-11-08 11:01:21
marker都出现弥散了，只有两种原因：1，你的marker质量出现问题。2，你的凝胶分辨率太高，将marker都给分辨了。但是第一个问题一般不会出现，所以应该是凝胶的分辨率太高，电压和胶浓度都有影响，稍微降低一下胶的浓 ...

我用的胶浓度为2%的，我会尝试一下降低胶的浓度，十分感谢！
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5楼2013-11-08 15:11:40
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